[发明专利]一种单链环状DNA的制备方法有效
申请号: | 202010500803.9 | 申请日: | 2020-06-04 |
公开(公告)号: | CN111793619B | 公开(公告)日: | 2022-01-07 |
发明(设计)人: | 梁兴国;刘梦琴;王伟男;隋哲;安然 | 申请(专利权)人: | 中国海洋大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人: | 袁晓玲 |
地址: | 266101 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明属于核酸技术领域,涉及一种单链环状DNA的制备方法,通过PCR制备出其中一条链的5′端带有磷酸基团的中等长度的单磷酸化双链DNA,然后将环化反应所需的中等长度的单磷酸化双链DNA与辅助环化的模板DNA按照一定比例混合,加入耐热连接酶和反应缓冲液混合配制成连接反应体系,进行高温变性和降温连接的多次循环,制得只有一条链环化的双链产物;从中纯化分离出已环化的单链环状DNA,并进行电泳检测。该方法不需要制备单链DNA,直接以中等长度双链DNA为原料,采用双链变温循环连接反应高效制备中等长度单环DNA;酶法连接成环能够打开中等长度双链DNA复杂的二级结构,提高中等长度单链环状DNA的产率。 | ||
搜索关键词: | 一种 链环 dna 制备 方法 | ||
【主权项】:
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