[发明专利]基于split-HRV 3C蛋白酶的蛋白相互作用检测方法有效

专利信息
申请号: 202011123536.4 申请日: 2020-10-20
公开(公告)号: CN112342211B 公开(公告)日: 2022-08-09
发明(设计)人: 易犁;汪声晨;张发英;云月利;张桂敏 申请(专利权)人: 湖北大学
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/70;C12Q1/37;G01N15/14
代理公司: 武汉泰山北斗专利代理事务所(特殊普通合伙) 42250 代理人: 程千慧
地址: 430062 湖北*** 国省代码: 湖北;42
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摘要: 发明涉及一种基于split‑HRV 3C蛋白酶‑E.coli ClpXP系统的蛋白相互作用检测方法,原理为:由于ClpXP‑SsrA降解途径的存在,融合sfGFP‑HRV 3C蛋白酶底物多肽‑SsrA的融合蛋白可被大肠杆菌ClpXP复合物识别,导致sfGFP的降解,呈现低强度绿色荧光。将捕获蛋白和诱饵蛋白分别融合在的split‑HRV 3C蛋白酶的N端和C端结构域,当捕获蛋白和诱饵蛋白发生相互作用时,N端和C端HRV 3C蛋白酶融合形成具有完整功能的HRV 3C蛋白酶,对相应底物多肽切割识别,导致sfGFP的积累和荧光强度的提升。本发明通过对ClpXP‑SsrA降解机器,sfGFP和split‑HRV 3C蛋白酶的整合,根据绿色荧光强弱,可在宽阔温度范围内,高效灵敏的检测蛋白‑蛋白相互作用。
搜索关键词: 基于 split hrv 蛋白酶 蛋白 相互作用 检测 方法
【主权项】:
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