[发明专利]基于split-HRV 3C蛋白酶的蛋白相互作用检测方法有效
申请号: | 202011123536.4 | 申请日: | 2020-10-20 |
公开(公告)号: | CN112342211B | 公开(公告)日: | 2022-08-09 |
发明(设计)人: | 易犁;汪声晨;张发英;云月利;张桂敏 | 申请(专利权)人: | 湖北大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/70;C12Q1/37;G01N15/14 |
代理公司: | 武汉泰山北斗专利代理事务所(特殊普通合伙) 42250 | 代理人: | 程千慧 |
地址: | 430062 湖北*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明涉及一种基于split‑HRV 3C蛋白酶‑E.coli ClpXP系统的蛋白相互作用检测方法,原理为:由于ClpXP‑SsrA降解途径的存在,融合sfGFP‑HRV 3C蛋白酶底物多肽‑SsrA的融合蛋白可被大肠杆菌ClpXP复合物识别,导致sfGFP的降解,呈现低强度绿色荧光。将捕获蛋白和诱饵蛋白分别融合在的split‑HRV 3C蛋白酶的N端和C端结构域,当捕获蛋白和诱饵蛋白发生相互作用时,N端和C端HRV 3C蛋白酶融合形成具有完整功能的HRV 3C蛋白酶,对相应底物多肽切割识别,导致sfGFP的积累和荧光强度的提升。本发明通过对ClpXP‑SsrA降解机器,sfGFP和split‑HRV 3C蛋白酶的整合,根据绿色荧光强弱,可在宽阔温度范围内,高效灵敏的检测蛋白‑蛋白相互作用。 | ||
搜索关键词: | 基于 split hrv 蛋白酶 蛋白 相互作用 检测 方法 | ||
【主权项】:
暂无信息
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