[发明专利]一种氨基甲酸乙酯水解酶突变体及其应用

摘要

本发明公开了一种氨基甲酸乙酯水解酶突变体及其应用。所述氨基甲酸乙酯水解酶突变体由根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)d3的酰胺酶基因经过突变得到，野生型酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述氨基甲酸乙酯水解酶突变体由野生型酰胺酶经过R94P、I97L、S177C或G195A中的至少一个位点突变所得。发明筛选得到来自Agrobacterium tumefaciens d3的酰胺酶，在乙醇浓度0％‑20％之间，剩余酶活高于90％，高于25％之后酶活下降迅速，该酶对低浓度乙醇表现出极好的耐受性。通过半理性改造，构建了一个21个点突变的突变体库，并从中筛选得到4个酶活有提高的突变位点(R94P、I97L、S177C、G195A)，组合突变株I97L/G195A酶活提高了5.2倍，由原来的395U/L提高到2442U/L。