[发明专利]一种构建MSH2基因敲除细胞系的方法在审

专利信息
申请号: 202011373830.0 申请日: 2020-11-30
公开(公告)号: CN112501169A 公开(公告)日: 2021-03-16
发明(设计)人: 李军;程扬;项阳;赵家顺 申请(专利权)人: 武汉爱博泰克生物科技有限公司
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10
代理公司: 湖北天领艾匹律师事务所 42252 代理人: 杨建军
地址: 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** 国省代码: 湖北;42
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摘要: 发明涉及一种构建MSH2基因敲除细胞系的方法,涉及基因工程技术领域。所述方法是采用CRISPR/Cas9系统来制备MSH2基因敲除细胞系,首先针对MSH2基因设计两个sgRNA序列,利用分子克隆技术构建重组质粒;然后将重组质粒转染至HeLa细胞,通过PCR验证sgRNA的活性后,进行嘌呤霉素药物筛选和单克隆化处理,然后提取单克隆细胞株基因组DNA以及总蛋白,进行MSH2基因水平测序鉴定以及蛋白水平表达检测,获得MSH2基因敲除HeLa细胞系。本发明构建的MSH2基因敲除HeLa细胞系是一种基因稳定遗传的细胞系。本发明提供的方法可用于MSH2基因的定向敲除致使其功能失活,具有简便、高效、快速、低成本等特点,对于MSH2基因功能和相关通路的研究具有重要意义。
搜索关键词: 一种 构建 msh2 基因 细胞系 方法
【主权项】:
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