[发明专利]一种基于ddPCR检测CRISPR/Cas诱导的基因突变和基因编辑频率的方法在审
申请号: | 202011575802.7 | 申请日: | 2020-12-28 |
公开(公告)号: | CN112646866A | 公开(公告)日: | 2021-04-13 |
发明(设计)人: | 彭城;徐俊锋;丁霖;陈笑芸;汪小福 | 申请(专利权)人: | 浙江省农业科学院 |
主分类号: | C12Q1/6858 | 分类号: | C12Q1/6858;C12Q1/6895 |
代理公司: | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人: | 王焕 |
地址: | 310000 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明提供了一种基于ddPCR检测CRISPR/Cas诱导的基因突变和基因编辑频率的方法。所述方法包括根据CRISPR/Cas靶序列的突变位置,设计一对变异位点特异性PCR扩增引物和变异位点特异性探针,以及一对内源参考基因特异性PCR扩增引物和内源参考基因特异性探针;其中,所述变异位点特异性探针设置在突变位点区域,并且探针的5’端位于PAM区且连接有第一荧光基团,3’端连接有第一淬灭基团;所述内源参考基因特异性探针的5’端连接有第二荧光基团,3’端连接有第二淬灭基团。所述方法对于基因突变检测灵敏度高,对基因编辑频率的检测下限(LOD)更低,更接近预期的编辑频率值。 | ||
搜索关键词: | 一种 基于 ddpcr 检测 crispr cas 诱导 基因突变 基因 编辑 频率 方法 | ||
【主权项】:
暂无信息
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