[发明专利]一种卤化酶重组表达载体制备方法及其应用在审

专利信息
申请号: 202110017906.4 申请日: 2021-01-07
公开(公告)号: CN112592929A 公开(公告)日: 2021-04-02
发明(设计)人: 王苗;李昱良;刘建国;王倩;任群利;胡欢;李小兰 申请(专利权)人: 遵义医科大学
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N9/14;C12N15/55;C12N15/66
代理公司: 遵义市创先知识产权代理事务所(普通合伙) 52118 代理人: 刘创先
地址: 563000 贵*** 国省代码: 贵州;52
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摘要: 发明以链霉菌Streptomyces sp.FJS31‑2基因组为模板,特异引物扩增卤化酶片段,TA克隆,T载体通用引物进行菌液PCR鉴定,abx H/T质粒BglⅡ和HindⅢ限制性内切酶切鉴定并胶回收目的片段,连接相同酶切并去磷酸化处理的质粒载体,连接产物室温过夜连接,转化克隆菌株JM109感受态细胞。进行特异引物菌液PCR鉴定,扩增出目的条带的阳性克隆提质粒限制性内切酶酶切鉴定,切出载体片段和插入的目的条带。测序验证的阳性菌转化表达菌株BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,特异引物菌液PCR鉴定。在不同温度下进行IPTG诱导表达,蛋白样品处理,SDS‑PAGE蛋白质电泳分析,可见很明显的诱导蛋白条带,卤化酶大小为65KD。
搜索关键词: 一种 卤化 重组 表达 载体 制备 方法 及其 应用
【主权项】:
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