[发明专利]CYP1B1基因缺失斑马鱼的制备

摘要

本发明利用CRISPR/Cas9技术，构建成了CYP1B1基因缺失斑马鱼，具体步骤包括：1)根据CYP1B1基因序列，确定CYP1B1靶位点；2)制备gRNA；3)体外转录Cas9mRNA；4)将Cas9mRNA和gRNA混合，注射到单细胞期斑马鱼胚胎中；5)将F0胚胎饲养至性成熟；6)与野生型成鱼外交，筛选F0；7)选取可产生有效突变的F0自交，筛选F1；8)从F1代突变体中挑选相同突变的雌鱼和雄鱼，杂交得到F2代；9)筛选CYP1B1基因敲除纯合子即为稳定遗传的CYP1B1基因缺失斑马鱼。本发明构建的CYP1B1基因缺失斑马鱼可稳定遗传，CYP1B1基因缺失斑马鱼可用于结肠癌、胃癌、食管癌病的研究。