[发明专利]BVDV纳米抗体及其制备方法及应用有效

专利信息
申请号: 202110392556.X 申请日: 2021-04-13
公开(公告)号: CN113512110B 公开(公告)日: 2022-10-14
发明(设计)人: 盛金良;杨艳;陈创夫;肖盛中;李岩;周子恒;李玉豪;宋雯妍;郑婷 申请(专利权)人: 石河子大学;新疆方牧生物科技有限公司
主分类号: C07K16/10 分类号: C07K16/10;C07K16/00;C12N15/70
代理公司: 乌鲁木齐恒智专利商标代理事务所(普通合伙) 65102 代理人: 李靖
地址: 832000 新疆维*** 国省代码: 新疆;65
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摘要: 发明属于生物技术检测领域,公开了一种抗BVDV‑重要功能蛋白纳米抗体及其制备方法和应用,主要通过构建BVDV‑NS5A表达载体,纯化NS5A蛋白;使用BVDV灭活苗对羊驼进行免疫,分离羊驼外周血淋巴细胞,通过巢式PCR获得VHH基因,构纳米抗体噬菌体展示文库,目的基因插入率为90.8%,文库容量为1.02×107CFU/mL,经M13K07噬菌体救援建立纳米抗体噬菌体展示文库容量为1.68×1016CFU/mL;以BVDV‑重要功能蛋白作为目标抗原,对扩繁得到的噬菌体展示文库进行三轮亲和筛选,从该文库筛选出与E0/E2/NS5A/NS3蛋白特异性结合纳米抗体,通过ELISA检测其反应原性,特异性良好的纳米抗体进行测序,分析序列,进而获得该特异性纳米抗体的基因,构建原核表达载体,对其进行原核表达、纯化和鉴定,得到所需纳米抗体Nb‑Y1、Nb‑Y2、Nb‑Y3,并通过Western blot验证纳米抗体和BVDV重要功能蛋白的反应原性。
搜索关键词: bvdv 纳米 抗体 及其 制备 方法 应用
【主权项】:
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