[发明专利]一种酿酒酵母大片段基因编辑的方法在审
| 申请号： | 202110670275.6 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113373172A | 公开（公告）日： | 2021-09-10 |
| 发明（设计）人： | 马文建;周飒;李世祺;陈特长;穆家康;丁春阳;张腾月 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学;齐鲁理工学院 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/113;C12N15/90;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 韩晓梅 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开一种酿酒酵母大片段基因编辑的方法，步骤如下：⑴设计GIM基因表达盒：将半乳糖启动子控制的I‑SceI基因的表达盒从质粒pGSHU扩增下来，并在上、下游引物中各插入一个I‑SceI识别序列，同源臂为52bp；⑵构建双DSBs突变株：利用PEG/LiAC法向酵母中进行转化，涂布于Hyg筛选板上生长，挑取生长出的单克隆菌株提取基因组，验证；⑶设计目的基因表达盒：通过重叠延伸PCR，将目的基因与KanMX6筛选标记连接起来，上下游同源臂68bp，该同源臂为双DSBs中上游DSB两端的碱基序列。本发明使得大片段基因的敲入成为可能，实现敲入位点可控的同时，降低了脱靶现象发生的几率，提高准确性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酿酒 酵母 片段 基因 编辑 方法 | ||
【主权项】：
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