[发明专利]一种腺病毒质粒载体及腺病毒的制备方法在审

专利信息
申请号: 202111471784.2 申请日: 2021-12-02
公开(公告)号: CN114085871A 公开(公告)日: 2022-02-25
发明(设计)人: 毕杨;范家铭;何通川 申请(专利权)人: 重庆医科大学附属儿童医院
主分类号: C12N15/861 分类号: C12N15/861;C12N7/00
代理公司: 重庆立川知识产权代理事务所(普通合伙) 50285 代理人: 廖明亮
地址: 400014 *** 国省代码: 重庆;50
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摘要: 发明提供了一种腺病毒质粒载体及腺病毒的制备方法,设计含有腺病毒质粒载体中20 bp的位点序列1和位点序列2的上下游引物,扩增获得目的基因片段,酶切获得末端具有同源序列的腺病毒质粒载体,通过Gibson DNA反应将目的基因组装入载体,载体中含有ccdB基因,极大地减少了重组子的筛选工作量,重组有效率95%以上,随后在包装细胞中制备腺病毒,减化了构建腺病毒的步骤,出毒成功率80%以上,病毒滴度大于1012 pfu/ml,并且保证了重组腺病毒基因组的完整性,腺病毒运载目的基因可在细胞内有效表达具有正常生物学活性的目的蛋白。本发明优化了腺病毒制备方法,在基于腺病毒的基因表达、疾病模型研究、基因治疗、疫苗研发等基础及临床转化研究领域具有广阔的应用前景。
搜索关键词: 一种 病毒 质粒 载体 制备 方法
【主权项】:
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