[发明专利]斑马鱼心脏发育相关基因簇缺失突变体中主效基因的筛选方法和应用

摘要

本发明公开了斑马鱼心脏发育相关基因簇缺失突变体中主效基因的筛选方法和应用，包括确定斑马鱼hoxbb基因簇中hoxb1b、hoxb5b、hoxb6b和hoxb8b基因的靶点位置并分别设计靶点gRNA序列和引物进行PCR扩增，体外转录获得gRNA与Cas9mRNA显微注射到斑马鱼中，有突变的斑马鱼与野生型杂交得杂合子F1，性成熟的F1交配得纯合突变体，对基因敲除的后代显微成像和单基因鉴定初步筛选具有明显表型的基因hoxb1b，单细胞测序数据分析hoxbb中四个单基因早期表达情况和原位杂交、基因敲低与过表达筛选出与心脏早期发育相关的主效基因hoxb1b，有助于寻找致病靶点和药物筛选。