[发明专利]一种梅山猪气喘病间接ELISA检测方法在审
| 申请号： | 202211014971.2 | 申请日： | 2022-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN115433737A | 公开（公告）日： | 2022-12-06 |
| 发明（设计）人： | 涂尾龙;黄济;王洪洋;张莺莺;谈永松;曹建国;卫金良;曹传闺;甘叶青;唐赛勇 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;G01N33/543;G01N33/569 |
| 代理公司： | 成都华复知识产权代理有限公司 51298 | 代理人： | 朱娇艳 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种梅山猪气喘病间接ELISA检测方法，包括以下实施步骤：T1：构建重组表达质粒PET‑32a‑N1N2，以PRRSV NSP2基因组为模板，针对N1、N2基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增得到目的片段，构建克隆质粒pMD‑18T‑N1N2，对克隆载体和原核表达载体pET‑32a同时进行双酶切，连接后得到重组表达质粒pET‑32a‑N1N2；T2：对目的蛋白进行表达及纯化，将构建重组表达质粒PET‑32a‑N1N2转入E.coliBL21(DE3)，诱导表达融合蛋白，利用His柱层析进行纯化，得到经SDS‑PAGE电泳分析纯度较高的蛋白，利用RT‑PCR和蛋白原核表达技术获得纯度较高且具有良好特异性和免疫原性的融合蛋白PET‑32a‑N1N2，以融合蛋白PET‑32a‑N1N2为包被抗原，建立检测蓝耳病血清抗体的间接ELISA方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 山猪 气喘 间接 elisa 检测 方法 | ||
【主权项】：
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