[发明专利]一种防治立枯丝核菌病害的dsRNA纳米农药的制备及其应用

摘要

本发明涉及一种防治立枯丝核菌病害的dsRNA纳米农药的制备及其应用，包括以下步骤：通过体外转录合成靶向立枯丝核菌多聚半乳糖醛酸酶基因RsPG1、过氧化氢酶基因RsCAT和钙调神经磷酸酶敏感的锌指蛋白基因RsCRZ13个基因的组合RsPG1‑RsCAT‑RsCRZ1‑dsRNA，设带有同源臂的引物将RsPG1、RsCAT、RsCRZ1三个基因串联起来；利用引物对RsPG1‑dsT7F/RsCRZ1‑dsR和引物对RsPG1‑dsF/RsCRZ1‑dsT7R分别扩增出正义链5’‑端带T7启动子和反义链5’‑带T7启动子的模板，并回收纯化；根据诺唯赞T7 RNAi Transcription Kit说明书进行体外转录，最后纯化后得到RsPCC‑dsRNA。通过本发明，将合成的RsPCC‑dsRNA稀释至50μg/μL，喷施水稻叶片表面，后接种立枯丝核菌，发现喷施RsPCC‑dsRNA的植株上立枯丝核菌引起的症状明显减轻，病斑面积为对照31.6%，且寄主病组织中菌丝量和菌株靶基因的表达量均有明显下调。