[发明专利]一种提高磷脂酶D合成PS活性的理性定向进化方法在审
申请号: | 202211699169.1 | 申请日: | 2022-12-28 |
公开(公告)号: | CN116103264A | 公开(公告)日: | 2023-05-12 |
发明(设计)人: | 赵旭蕊;林颖珺;林秀芬;张倩;韩尧跃;卢英华 | 申请(专利权)人: | 厦门蓝湾科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/16 | 分类号: | C12N9/16;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/11;C12R1/19 |
代理公司: | 重庆萃智邦成专利代理事务所(普通合伙) 50231 | 代理人: | 竺栋;文怡然 |
地址: | 361026 福建省*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明涉及生物技术领域,公开了一种提高磷脂酶D合成PS活性的理性定向进化方法,本方案通过文献对比确定ZET4的活性中心,再通过AutoDock Vina将PLD(2ZE4)分别与底物PC和L‑ser进行分子对接,确定底物分子与酶分子的绑定位点,进行蛋白突变设计,对Y135A、Y135I、T181A、T181I、Q387A、Q387I、D392A、D392I和T194I点位进行单点突变或者两组组合突变,其中T181I、Q387A和Q387I构建的突变菌株的PS产率有所提高,由27.46%提高至30.11%、36.71%、36.90%;突变菌株T194I磷脂酶D的PS产率最高,高达58.32%,相同反应条件下与原始菌株磷脂酶D相比提高了112%;突变体T194I+Q387A和T194I+Q387I的PS产率达到71.24%和73.20%,与WT相比分别提高了159%和167%,与T194I(PS产率为58.32%)相比分别提高了22.15%和25.51%。 | ||
搜索关键词: | 一种 提高 磷脂酶 合成 ps 活性 理性 定向 进化 方法 | ||
【主权项】:
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