[发明专利]赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术

摘要

本发明是赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化的组织培养技术。本发明采用特定的酶液及酶解方法游离得叶肉原生质体；采用特定的大量元素及维生素成分，采用特定的碳源及渗透压稳定剂，采用特定的激素配比方式等制成赤豆叶肉原生质体生长培养基；采用特定的激素配比方式制成愈伤组织扩增及分化培养基；采用特定波长的光照及温度作培养条件。采用本发明技术，原生质体能持续分裂，形成愈伤组织并最终分化成绿苗。

主权项

1.一种赤豆叶肉原生质体培养分化的方法，采用赤豆无菌真叶为游离原生质体材料，由混合酶液酶解得原生质体，经过原生质体培养、愈伤组织扩增和分化等步骤获得绿苗，其特征在于：(1)原生质体培养基中包含下述组分：——0.5-0.65M浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂；——无机盐成分：600～1000mg/L的CaCl2·2H2O，1200～1500mg/LKNO3，200-300mg/L的NH4NO3，60～90mg/L的KH2PO4，600～900mg/L的MgSO4；——维生素成分002～0.08mg/L的生物素，0.1～0.8mg/L的叶酸，100～200mg/L的肌醇，3.0～3.5mg/L的盐酸硫胺素，0.5～0.8mg/L的盐酸吡哆素，1.0～2.0mg/L的甘氨酸，3.0～4.0mg/L的烟酸；——植物激素成分：2，4-二氯苯氧乙酸，α一萘乙酸，6-苄氨基嘌吟和玉米素，用量各为0.3～1mg/L；(2)愈伤组织扩增培养基中含有如下植物激素成分：0.2-0.5mg/L的-苄氨基嘌呤，1-3mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸；(3)愈伤组织分化培养基中含有如下植物激素成分：1-5mg/L的6-苄氨基嘌呤。