[发明专利]一种提高绿豆叶肉原生质体分裂频率以培养再生器官的方法

摘要

在对绿豆叶肉原生质体培养中，用附加浓度分别为0.5毫克/升的生长素NAA，2，4-D与细胞分裂素BAP，ZTA的D2A培养基(铁盐和微量元素用量按MS培养基)，能使绿豆叶肉原生质体的分裂频率达7.86％。赤霉素GA3对原生质体分裂具有明显的抑制作用。采用同一浓度的2，4-D与BAP及ZEA分别混合配比远较以相同浓度的NAA与BAP及ZEA分别相配比的效应为好。所得愈伤组织经4个多月的培养产生了根。

主权项

1、一种从绿豆叶肉原生质体培养再生器官的方法，本发明的特征由下列各项构成：a.采用HgCl2的消毒得到无菌的绿豆种子；b.使消毒的无菌绿豆种子在25-26℃光照条件下，在基本培养基上生长9-21天；c.切取幼嫩叶子；d.切割小块的绿豆幼嫩叶片浸入含有混合酶液的CPW13M溶液中，其中酶液成份为0.1%(w/v)纤维素酶，0.4%(w/v)果胶酶；e.按d所制备的混合物试验材料，置于25-27℃摇床上处理17小时；f.经酶介17小时后用滤网过滤以便去除细胞及碎片，然后离心沉淀原生质体；g.用CPW13M溶液漂洗收集原生质体；h.在含有糖及植物激素2.4-D，NAA，BAP，Zeatip的原生质体培养基上进行原生质体悬浮培养；i.对绿豆原生质体在27℃及光照条件下进行浅层液体悬浮培养，约25天左右形成1～2毫米大小的愈伤组织；j.直径在1～2毫米的愈伤组织转接到固体培养基上进行扩增。k.愈伤组织转接到分化培养基，经多次继代，至出现类似胚状体结构；l.在含有植物激素的分化培养基上继代培养，一部分处理分化产生不定根。