[发明专利]还原型非糖基化重组人体白细胞介素-2的制备方法

摘要

本发明涉及制备还原型非糖基化重组人体IL2的方法，该方法包括提取转化微生物体内以颗粒形式存在的IL2，然后用反相HpLc纯化。

主权项

1.制备非糖基化重组人体白细胞介素2(IL2)的方法，所述人体IL2，一方面具有下述氨基酸排列顺序，即X-AlaProThrSerSerSerThrLysLysThrGlnLeuGlnLeuGluHisLeuLeuLeuAspLeuGlnMetIleLeuAsnGlyIleAsnAsnTyrLysAsnProLysLeuThrArgMetLeuThrPheLysPheTyrMetProLysLysAlaThrGluLeuLysHisLeuGlnCysLeuGluGluGluLeuLysProLeuGluGluValLeuAsnLeuAlaGlnSerLysAsnPheHisLeuArgProArgAspLeuIleSerAsnIleAsnValIleValLeuGluLeuLysGlySerGluThrThrPheMetCysGluTyrAlaAspGluThrAlaThrIleValGluPheLeuAsnArgTrpIleThrPheCysGlnSerIleIleSerThrLeuThr其中X代表蛋氨酸或氢原子，位于58，105和125位的三个半胱氨酸均为还原型；另一方面在体外的CTLL-2细胞的增生试验中具有与同一氨基酸顺序的氧化型IL2相似的生物活性，氧化型IL2在58-105位有一双硫键桥；该制备方法包括，先将转化的大肠杆菌(E.coli)体内以颗粒状累积的IL2溶于含有二硫苏糖醇和胍盐的还原介质中进行提取，然后通过沉淀纯化，继之用反相高效液相色谱仪纯化，用含有三氟乙酸的酸性洗脱液洗脱；该制备方法的特征在于a)将从上述色谱仪中洗脱出的主要液分不经过冷却或经过冷却至-20℃，而分离出水相，b)用含有柠檬酸的酸性介质稀释该主要液分或所得的该水相，然后于另一反相高效液相色谱柱上层析，用含有柠檬酸的酸性介质洗脱，再分离出上述的IL2。