[发明专利]抗生素GE2270的制备方法

摘要

本发明涉及一种新的命名为抗生素GE2270的抗生素物质，其加成盐、药物组合物以及它们作为药物的应用，特别是用于治疗涉及对其敏感微生物的感染的疾病。

主权项

1.具有如下特征的非盐形式的抗生素GE2270因子A的制备方法：A)紫外吸收光谱呈现出如下的最大吸收值：E1cm1％γmax(nm)0.1MHCl245(肩峰)3100.1MKOH245(肩峰)313pH7.4的磷酸盐缓冲液245(肩峰)314甲醇244(肩峰)265310B)石蜡糊中的红外吸收色谱呈现如下的最大吸收值(cm-1)：3700-3060；3060-2660(液体石蜡)；1650，1590，1490；1490-1420(液体石蜡)；1375(液体石蜡)；1310；1245；1210；1165；1090；1060；1020；970；930；840；810；750；720(液体石蜡)；700；该图谱的主要官能红外吸收带可归成为：v，(cm-1)指定3600-3100VNH.VOH1650酰胺I(vc＝0)1545杂环VC＝C和VC＝N1524，1495酰胺II(δNH)1250，1205芳香族δCH870杂环γCH745,700芳香族γCHC)以TMS作内标(0.00ppm)在DMSO-d6(六氘二甲基亚砜)中的1H-NMR图谱在500MHz显示出的各组信号(ppm)如下：每一信号的质子数标在括号内9.02(1)；8.68(1)；8.70(1)；8.57(1)；8.50(1)；8.43(1)；8.37(1)；8.26(1)；8.25(1)；7.4-7.20(9)；6.96(2)；6.02(1)；5.30-5.18(3)；5.01(1)；4.97(2)；4.80(1)；4.56(1)；4.30(1)；4.26(1)；3.98(1)；3.81(1)；3.79(1)；3.38(3)；2.72(1)；2.58(3)；2.48(3)；2.16(1)；2.13(1)；1.96(2)；1.88(1)；1.34(1)；0.87(3)；0.84(3)；D)以TMS作内标(0.00pm)在DMSO-d6中的13C-NMR图谱在125MHz显示出的各组信号(ppm)如下，Q代表四价碳原子或C＝O基团；173.69，Q；171.10，Q；169.83，Q；169.51，Q；168.45，Q；168.26，Q；167.84，Q；165.68，Q；164.75，Q；161.40，Q；161.23，Q；160.46，Q；160.29，Q；159.35，Q；153.42，Q；150.31，Q；150.11，Q；149.41，Q；146.93，Q；144.73，Q；143.75，Q；142.10，Q；141.78，Q；141.33，CH；140.97，Q；139，53，Q；128.68，CH；127.99.2〔CH〕；127.67，Q；127.67，CH；126.88，CH；126.76，2〔CH〕；123.17，CH；118.66，CH；116.43，CH；73.81，CH；69.41，CH2；67.97，CH；67.36，CH2；60.12，CH；58.63，CH3；58.24，CH；55.41，CH；48.15，CH；47.03，CH2；41.19，CH2；37.60，CH2；34.06，CH；29.76，CH2；25.85，CH3；24.28，CH2；18.49，CH3；17.98，CH3；11.99，CH3；E)在下述条件下进行反相HPLC分析时，保留时间(Rt)为14.9分钟：柱：U1trasphereODS(反相硅烷化硅胶；5微米)A1tex(Beckman)4.6mm(i.d)×250mm前置柱：Brownlee1absRP18(八癸基硅烷硅胶；5微米)；洗脱剂A：乙腈∶18mM磷酸钠70∶30(V/V)，调至pH7.0洗脱剂B：乙腈∶18mM磷酸钠10∶90(V/V)，调至pH7.0洗脱方式：在20分钟内洗脱剂A在洗脱剂B中从45％至70％的线性梯度洗脱流速：1.8ml/min紫外检测器：254nm内标：氯霉素(Rt＝3.7分钟)F)在惰性气氛下，在约140℃将样品预先干燥后进行元素分析，结果表明有如下组成：碳、氢、氮、硫；G)在如下色谱系统中Rf值为0.37：二氯甲烷∶甲醇为9∶1(V/V)，使用硅胶板(硅胶60F254；MerckCo)；显色；紫外线254nm，使用碘蒸气或用在最低量Davis培养基中枯草杆菌(B.Subtilis)ATCC6633的生物自检法，呈黄色色斑；内标：氯霉素(Rf0.56)H)FAB-MS分析在质/荷比(m/z)1290.3±0.1道尔顿显示出质子化分子离子的最低质量同位素；在下述实验条件下，用KratosMS-50双聚焦质谱仪分析，在图谱中所有具有高于800m/z质量单位的峰(同位素峰不计)低于分子离子的20％；以6千伏Xe快原子轰击，甘油基质；阳离子化方式；I)盐酸水解氨基酸分析表明有如下天然氨基酸存在：甘氨酸、(L)脯氨酸和(L)丝氨酸，实验条件如下：样品在存在含1％苯酚的6NHCl下，在105℃水解20小时，然后按如下两步衍生：a)用在无水丙醇中的2MHCl使羧酸官能团生成正丙酯(90℃，1小时)，然后在氮气氛下干燥；b)在室温下用五氟丙酸酐/无水二氯甲烷(1/9，V/V)将游离氨基转化为酰胺，进行一小时，然后在氮气氛下干燥；将如此获得的衍生物溶解于二氯甲烷中，并在如下条件下，使用HP5985B系统进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析：柱：将手性正-丙酰-L-缬氨酸叔丁酰胺聚硅氧烷涂于熔凝的二氧化硅毛细管柱上(25m×0.2mm直径；毛细管气相色谱(C.G.C)法分析)；温度方案，80℃4分钟，然后每分钟4℃；L)离子化研究通过在甲基溶纤剂/水中的0.1NHCl和0.1NNaOH滴定检测不到离子基团；在非水基质(乙酸)中的0.1NHClO4滴定显示弱的碱性基团；M)旋光率〔α〕D20＝+140.8；无水乙醇，浓度约5克/升该方法包括在可同化的碳源、氮源及无机盐存在下，在浸没需氧条件下培养玫瑰游动双孢菌(Planobisporarosea)CGMCC0141，并从中回收所产生的抗生素。