[发明专利]α-肿瘤坏死因子的反向反信使核糖核酸寡聚核苷酸序列的制备方法

摘要

本发明提供制备具有下式结构的新的α-TNF的反向反信使RNA寡聚核苷酸序列的方法5′3′(d)TCATGGTGTCCTTTCCAG-X118

主权项

1)制备具有式(Ⅰ)结构的α-TNF的反向反信使RNA寡聚核苷酸的方法，???5′?????????????????3′(d)TCA?TGG?TGT?CCT?TTG?CAG-X?(Ⅰ)???1??????????????????18X代表一个氢原子或全部或部分ⅠA序列：??5′???????????????3′-CC?TCA?TGC?TTT?CAG?TAG??(ⅠA)19??????????????????35可为游离型、烷化型、硫化型或聚L-赖氨酸型，其特征是在载体S上固定待合成的链(Ⅱ)3′位第一个核苷酸，其中S代表载体，Z代表一个含2～20碳原子的烃基，B1相当于第一个核苷酸的嘌呤或嘧啶碱基，其胺基功能基已被保护，R是保护基，用酸试剂将5′位羟基脱去保护基，得产物(Ⅲ)，其中S，Z和B1意义同上，产物(Ⅲ)与第二个核苷酸单体(Ⅳ)反应，其中R意义同上，B2相当于第二个核苷酸的嘌吟或嘧啶碱基，其胺基功能基已被保护，R1代表烷基或-OR′1，或-SR′1，其中R′1代表一个保护基，R2代表一个保护基，于是得产物(Ⅴ)，其中S，R，R1，B1和B2意义如上，产物(Ⅴ)经氧化后得产物(Ⅵ)，其中S，R，R1，B1，B2和Z意义如上，X1代表一个氧或硫原子，然后如上述由产物(Ⅱ)开始的反应，将产物(Ⅵ)与一个新的核苷酸单体反应产生一个新的环，直至所需的链形成，以得到最终的产物(Ⅶ)，其中S，R，R1，B1，B2，X1和Z意义同上，BZ代表序列的最后一个核苷酸，然后使寡聚核苷酸脱去保护基，从载体上分离，并将得到的产物纯化，或式(Ⅰ)所定义的寡聚核苷酸聚L-赖氨酸衍生物的制备方法，该方法的特点在于使产物(Ⅷ)与产物(Ⅳ)反应，得产物(Ⅸ)，式(Ⅷ)中S，Z，R，B1意义如上，式(Ⅸ)中S，R，Z，R1，B1和B2意义如上，然后经氧化，并去除载体和活化基团，得产物(Ⅹ)，其中R，R1，B1和B2意义如上，X1代表一个氧或硫原子，末端核糖被氧化后在还原性介质中与L-赖氨酸反应，得产物(Ⅺ)，其中R，R1，B1，B2和X1意义如上，然后按产物(Ⅵ)起始的反应步骤继续合成。