[发明专利]单纯感觉(或运动)神经纤维酶标抗体的制备方法

摘要

一种单纯感觉(或运动)神经纤维酶标抗体的制备方法，它包括制备人感觉(或运动)神经抗原乳剂，将抗原乳剂免疫动物制取抗体，按改良戊二醛二步法将上述动物血清与辣根过氧化物酶交联。本方法制得的酶标抗体分装，可放置较长时间，使用方便。使用时，将神经抗原、抗体反应，温育，温育后取出待染组织，经缓冲液冲洗掉未反应的酶，加入底物使之反应、显色，即可鉴别出感觉(或运动)神经，敏感性高，特异性强，操作简单，易于观察(用肉眼或显微镜下观察)。

主权项

1、单纯感觉(或运动)神经纤维酶标抗体的制备方法，其特征在于它包括：(1)制备人感觉(或运动)神经抗原乳剂：在15倍手术显微镜下抽取人体的单纯感觉(或运动)神经纤维，以Hank/s液体洗掉血细胞，将神经纤维研磨成浆状物，其浓度为25mg/ml-50mg/ml，神经纤维浆状物与弗氏佐剂以1∶3(体积比)加压混合，制成油包水的人感觉神经及运动神经抗原乳剂，液氮储存备用；(2)将抗原乳剂免疫动物制备抗体：分三次注射，其时间间隔及用量分别为：第一次4-8ml，三周后第二次注射，用量3-5ml，一周后第三次注射，用量为3-5ml，第三次注射后二周，抽血检测IgG含量；(3)层析、提纯抗体；(4)按改良戊二醛二步法将上述动物血清与辣根过氧化物酶(HRP)交联，其步骤是：(a)，将60mg辣根过氧化物酶(HRP)溶于1mlPH6.8/0.2M磷酸盐缓冲液(PBS)中，逐滴加入2.5%GA(戊二醛)溶液1ml，置室温18小时后，装入透析袋在生理盐水中透析，除去GA；(b)，透析袋内液体置称量瓶中，加入PH9.5/1M碳酸盐缓冲液1ml，4℃搅拌24小时，(c)，加入0.2M赖氨酸1ml，封闭被GA激活的酶的残基，室温2小时后，装透析袋内，在PH7.2/0.15MPBS中4℃透析过夜；(d)，透析袋内液体在电磁搅拌下滴加饱和硫酸铵，于4℃冰箱中静置1小时后，以4000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀用半饱和硫酸铵洗涤二次，溶于PH7.2/0.15MPBS中以同样的PBS4℃透析2-3天，至无MH4+为止；(e)，取出透析袋内液体以4000rpm离心30分钟，取上清液，测定效价、分装、冰冻保存备用。