[发明专利]制备减毒水痘-带状疱疹病毒疫苗的方法

摘要

以较高的ＶＺＶ产量制备活的减毒水痘—带状疱疹病毒疫苗。该新方法使活ＶＺＶ疫苗的大量制备更为实用。另外，最佳单层细胞培养条件提供了一种提高单层细胞密度的方法，该方法可用于提高病毒疫苗的产量。根据该方法，在常规培养容器中通常获得接近５００，０００个细胞／cm＃+[２]的细胞密度。

主权项

1．一种制备活的水痘-带状疱疹病毒(VZV)疫苗的方法，该方法包括：a．在足以使细胞高度复制的高营养条件下，将选自人二倍体细胞的VZV易感染细胞培养至在单层培养物中会合，并供给不能代谢的二糖；b．在尽可能接近会合点时，用实用范围内尽可能高感染复数的VZV感染细胞感染步骤(a)培养的细胞；c．将VZV感染培养物在高营养状态下维持22-96小时，并在感染性VZV产量达到峰值时收集；d．在收集VZV感染细胞前，用任选含有溶酶体营养剂如氯化铵或氯喹的生理溶液洗涤VZV感染培养物；e．将VZV感染细胞收集到最小体积的稳定溶液中，并且或者立即破碎细胞，或者冷冻这些细胞供以后破碎；f．破碎VZV感染细胞以最适地释放细胞结合的VZV，并除去细胞碎片，以提供无细胞VZV制备物；其中VZV易感染细胞是MRC-5细胞，减毒VZV是水痘-带状疱疹病毒的Oka株，培养温度是在30-37℃之间，二糖是以20-60mM提供的蔗糖；培养温度是35℃，感染复数是1∶25和1∶625之间，溶酶体营养剂是以20-50mM提供的氯化铵或以230μM提供的氯喹。