[发明专利]一种抗体／蛋白Ａ－ＤＮＡ探针的构建方法

摘要

本发明涉及一种抗体／蛋白Ａ－ＤＮＡ探针的构建方法，抗体指一抗和二抗，属生物工程技术领域，包括三个必需的步骤将抗体或蛋白与对苯醌（ＰＢＱ）反应，加入聚乙烯亚胺（ＰＥＩ），加入交联剂戊二醛，有构建的探针稳定性好，没有采用连结分子和其他中间步骤的麻烦，免疫－ＰＣＲ反应灵敏度和准确性高，非特异性扩增少，采用普通化学试剂，通用性强等优点，适于用来构建各种不同类型的抗体／蛋白Ａ－ＤＮＡ探针。

主权项

1.一种抗体/蛋白A-DNA探针的构建方法，抗体指一抗和二抗，其特征在于，该方法包括三个必需的步骤：将抗体或蛋白A与对苯醌(PBQ)反应，加入聚乙烯亚胺(PEI)，加入交联剂戊二醛，该方法的全部步骤罗列如下：第1步取0.01～10mg的抗体或蛋白A，溶于440μl的，浓度和pH值分别为90mmol/l和6.0的磷酸缓冲液中，以抗体为原料，最终构建成的探针是抗体-DNA探针，以蛋白A为原料，最终构建成的探针是通用型蛋白A-DNA探针；第2步向第1步制备的溶液中加入120μl的PBQ溶液，再把混和溶液置于温度为37℃的黑暗环境，反应时间为1小时；第3步将第2步的反应液上SephadexG100柱，并用浓度为0.1～0.2mol/l的NaCl溶液洗柱；第4步收集第3步形成的洗涤液4ml；第5步向第4步收集的溶液中加入360μl的，浓度为1mol/l的NaHCO3的溶液；第6步向第5步制备的溶液中加入266μg的PEI后，置于温度为37℃的黑暗环境，反应时间为2小时；第7步将第6步的反应液装入透析袋中，对浓度和pH值分别为5mmol/l和6.8的磷酸缓冲液透析，透析时间为12小时；第8步收集第7步的经透析的反应液，保藏在温度为4℃的环境，备用；第9步取经提取纯化的质粒PNCDNA1μg，溶于20μl的，浓度和pH值分别为5mmol/l和6.8的磷酸缓冲液中；第10步将第9步制备的溶液置于温度为100℃的沸水中，时间为3分钟，再把溶液置于冰中，时间为3分钟，重复上述操作三次；第11步向第10步形成的溶液中加入20μl的第8步的冷藏溶液；第12步向第11步的混和溶液中加入6μl的，浓度为5％的戊二醛溶液，再在温度为37℃的环境下孵育10分钟；第13步将第12步的反应液代替第2步的反应液，重复第3、4步，即得抗体-DNA探针或蛋白A-DNA探针。