[发明专利]抗CD4和趋化因子受体结构域复合物的抗体及其抵抗HIV感染的应用

摘要

本发明涉及按照所述的方法及筛选步骤以能表达CD4的T淋巴细胞，例如外周血单核T细胞，胸腺细胞，脾细胞和白血病或淋巴瘤衍生的T细胞系例如HPB－ALL或SUP－T细胞作为免疫原生产的单克隆抗体。本发明单克隆抗体的特性在于其能在体内或体外中和人类免疫缺陷病毒(HIV)及相关的免疫缺陷病毒的原代分离物。此抗体是针对含有与趋化因子受体的结构域结合的CD4蛋白质的宿主细胞抗原复合物的，对第一型的HIV(HIV－1)所有分化体的原代分离物和第二型的HIV(HIV－2)及猿猴免疫缺陷病毒(SIV)的原代分离物具有广泛的中和活性。本发明也涉及筛选及制造此种抗体的方法，能分泌此类抗体的杂交瘤，含有此抗体的药物组合物和在灵长类，包括人类中，用此类抗体在接触病毒前后预防免疫缺陷病毒所造成的感染，此类抗体的原靶为可表达CD4的淋巴细胞。

主权项

1．含CD4趋化因子受体的宿主细胞抗原复合物的抗体的制备方法，包括：a．使用表达CD4的T细胞作为免疫原，这些T细胞选自下列组中：ⅰ．选自由外周血单核T细胞，胸腺细胞或脾细胞组成的组的正常T淋巴细胞；或ⅱ．选自由SUP-T和HPB-ALL组成的组的衍生自T淋巴瘤或白血病的T细胞系细胞；b．分离并以PBS清洗表达CD4的T细胞；c．以腹膜内注射方式对动物进行免疫接种，这些动物包括BALB/c小鼠，CD1小鼠，转基因小鼠，大鼠，或恒河猴，这些动物均注射有5-10x106分离且以PBS清洗过的PBS或弗氏完全佐剂中的T细胞，接着每周或每两个月以5-10x106分离且以PBS清洗过的不含佐剂的T细胞进行多次腹膜内强化注射，总共3至6个月，最后一次强化注射是在进行融合以形成杂交瘤之前3天以静脉内方式进行的；d．测试接受免疫接种动物的血清是否含可与rsCD4结合的抗体；e．将曾接受免疫接种且其血清在步骤d中呈阳性的动物的脾脏切除以获得脾细胞；f．将脾细胞与无限增殖恶性细胞系的细胞进行融合以形成杂交瘤，克隆此杂交瘤并筛选能分泌具有下列特性的抗体的杂交瘤：ⅰ．与rsCD4结合；ⅱ．在免疫荧光测定中可与表达CD4的细胞结合，其中结合的模式在高分辨率荧光显微镜下呈＂帽状＂；ⅲ抑制HIVgp120与表达CD4的细胞间的结合；ⅳ．与已结合了HIVgp120的表达CD4的细胞结合；及ⅴ．在体外微小空斑测定中于＜10μg/mL的浓度下可中和HIV原代分离物，对50％中和活性而言浓度优选的是在0.01-10μg/mL之间，而对90％中和活性而言浓度优选的是在0.1-35μg/mL之间。