[发明专利]用蚕表达重组人的促红细胞生成素制备药物的方法

摘要

本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产多肽类药物技术领域。以家蚕幼虫、蛹和蛾作为生物反应器，通过基因工程技术获得带有人的促红细胞生成素基因的重组家蚕核型多角体病毒，接种家蚕幼虫、蛹和蛾进行表达。表达产物大小约为25-27KD，经过分离纯化获得精品，冷冻干燥成为针剂，活性108单位/mg。表达产物经过超声波处理后冷冻干燥制成胶囊，针剂和口服胶囊药物经动物实验证明有明确的生红细胞效果，首次实现用家蚕生产重组人的促红细胞生成素注射药物和口服药物的发明与现有技术相比，本发明方法中的原料易得、生产成本低，药物效果尤其是口服效果良好，具有十分重大的实施价值。

主权项

1、一种用蚕幼虫、蛹、蛾作为生物反应器，通过基因工程技术获得人的促红细胞生成素(EPO)的针剂或口服胶囊剂的方法，其特征在于：通过反转录以人的血浆细胞总RNA为模板合成hEPO基因，该基因长为600bp，5’端上端带有Bg1II和EcoRI酶切位点，3’端下游带有BamHI位点，将hEPO基因克隆进入pBM030载体中，获得重组转移载体pBMEPO，与野生型家蚕核型多角体病毒基因组DNA重组，筛选出带有hEPO基因的重组病毒CGMCCNO0337，在家蚕幼虫、蛹、及蛾中高表达rhEPO，表达产物为25-27KD，将表达产物经纯化制成冻干粉剂，或进一步制成口服胶囊。