[发明专利]一种抗肿瘤免疫疫苗的制取方法

说明书

本发明属于医学领域的一种免疫疫苗的制取方法，特别涉及到通过融合方法制取抗肿瘤免疫疫苗的方法。

各种恶性肿瘤严重危害着人类的健康。目前治疗肿瘤的方法主要依靠手术切除，再配以相应的化学药物治疗以及放射治疗，这些传统的治疗肿瘤的方法尽管取得了很大成绩，但不能起到免疫的作用，并且化学药物治疗或放射治疗疗效有限，还往往带来严重的副作用，使治疗后的病人身体素质严重下降，继而并发其它疾病，并易导致肿瘤的转移和复发。发明人对肿瘤的免疫治疗已研究多年，并在1997年美国自然医学杂志(NATURE MEDICINE.VOLUME3.NUMBER5.May1997第558-561页)和1998年美国PNAS杂志(Proc.Natl.Acad.Sci.USA VOL.95,May1998第6229-6283页)发表过相应的论文。这些研究成果表明融合树突状细胞与肿瘤细胞可形成一个新的、具有免疫功能的细胞，但仍在技术上需要一一融合，而且大多数人体的肿瘤细胞难以在体外传代培养，因而影响了其融合细胞的制作，限制了其广泛应用。因而，提出一种能起到免疫疗效的疫苗制取方法，是肿瘤医学界和生物医学界共同追求的目标。

本发明的目的在于解决现有已报导的融合技术中的不足，针对肿瘤细胞具有特异抗原，而树突状细胞是天然的、功能强大的抗原递呈细胞，通过融合方法，提出一种制取抗肿瘤免疫疫苗的方法。

本发明是通过以下方案实现的：先对非树突状细胞之间进行融合，再把融合的非树突状细胞与树突状细胞融合，从而得到具有细胞表面多种类抗原的融合细胞疫苗。

由于采用本发明方法制取的免疫疫苗除了具有肿瘤特异性抗原以外，仍保留了树突状细胞作为抗原传递细胞所需的各种表面抗原，并且在制取过程中通过对来自不同病人的同种肿瘤细胞或不同种肿瘤细胞的融合，从而使疫苗具有如主要组织相容性复合体Ⅰ和Ⅱ、共同刺激抗原、细胞表面多种类肿瘤抗原，达到诱发机体抗肿瘤能力和应用免疫治疗技术调动机体识别肿瘤抗原的能力，所以本发明集中多种肿瘤的共同性，使得融合得到的疫苗表面具有多种、多样性抗原表达，而达到其通用性，解决了治疗多种肿瘤病人所需免疫疫苗的制取方法，为改变传统的肿瘤治疗方法提供了重要的物质基础。

以下是对本发明的详细描述：

从哺乳动物中取得树突状细胞和非树突状细胞，这些哺乳类动物可以是鼠、人类、牛。非树突状细胞是这些哺乳类动物的肿瘤细胞。非树突状细胞之间的融合是来自同类不同哺乳动物同种肿瘤细胞的融合，也可以是来自同类不同哺乳动物不同种肿瘤细胞的融合，例如：不同病人的同种肿瘤细胞之间的融合或不同病人的不同种肿瘤细胞之间的融合，非树突状细胞(如肿瘤细胞)之间融合后，产生融合的肿瘤细胞，将这样的肿瘤细胞再与树突状细胞融合，从而得到抗肿瘤免疫疫苗。采用本发明的方法制得的疫苗，具有细胞表面多种类抗原的特性。上述非树突细胞之间的融合以及将融合后的非树突状细胞与树突状细胞的融合，均采用化学方法融合或物理学方法融合或生物学方法融合以及受体指引型细胞融合法。物理学方法融合可采用电融合。树突状细胞和肿瘤细胞可来自同体或异体，可来自人类个体细胞。融合细胞疫苗的细胞表面抗原是多种类肿瘤抗原。

树突状细胞与非树突状细胞的化学方法融合具体包括以下过程：

a、培养一定量的树突状细胞；

b、取得一定量的非树突状细胞，这些非树突状细胞是已经经过融合的，其细胞表面具有多种类抗原；

c、将上述树突状细胞与非树突状细胞按比例通过一种融合剂接触在一起；

d、细胞的融合需要一个培养过程，将上述接触在一起的细胞培养在一种培养基中，选择性培养所需的融合细胞疫苗。

树突状细胞与非树突状细胞电融合包括以下过程：将树突状细胞与非树突状细胞按比例混合于5％葡萄糖溶液，把装该混合液的槽置于电脉冲仪的正负极之间，通过通电，在高压电脉冲的作用下，使得上述二种细胞在一瞬间接触，结合成融合细胞疫苗。这里的非树突状细胞是已经经过融合的。

上述化学方法融合或电融合中，树突状细胞与非树突状细胞的比例可以是1∶1-25∶1。

非树突状细胞(如人体肿瘤细胞)之间的化学方法融合包括以下过程：

a、提取不同病人的同种肿瘤细胞或提取不同病人的不同种肿瘤细胞，这些细胞表面具有多种类肿瘤抗原。

b、通过一种融合剂将上述同种肿瘤细胞接触在一起或不同种肿瘤细胞接触在一起。

c、细胞的融合需要一个培养过程，将接触在一起的细胞培养在一种培养基中，选择培养融合细胞。