[发明专利]用于有效反转录丙型肝炎病毒(HCV)RNA的寡核苷酸引物及其使用方法无效
申请号: | 00104179.7 | 申请日: | 2000-02-03 |
公开(公告)号: | CN1270228A | 公开(公告)日: | 2000-10-18 |
发明(设计)人: | J·M·林南;K·M·戈曼 | 申请(专利权)人: | 奥索临床诊断有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;G01N33/576 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人: | 谭明胜 |
地址: | 美国*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 有效 转录 肝炎 病毒 hcv rna 寡核苷酸 引物 及其 使用方法 | ||
1.一种用于反转录生物样品中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的方法,该方法包括下列步骤:
(a)在寡核苷酸引导与至少部分所述RNA互补的DNA的合成的条件下,使来源于所述样品的RNA与一种或多种寡核苷酸接触;
其中所述的寡核苷酸选自:
(i)5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.:1>、
(ii)5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.:2>、
(iii)5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.:3>、
(iv)5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.:4>、
(v)5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.:5>、
(vi)5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.:6>、和
(vii)上述任意寡核苷酸的任意组合物。
2.一种如权利要求1中所述的方法,其中所述的样品选自血液、血清、血浆、唾液和脑脊液。
3.一种如权利要求1中所述的方法,还包括(b)回收所述的cDNA的步骤。
4.一种用于检测生物样品中丙型肝炎病毒RNA存在的方法,所述的方法包括下列步骤:
(a)用来源于所述样品的RNA作模板并用与所述RNA中含有的一段序列互补的寡核苷酸作引物来进行反转录反应,从而产生HCV特异性反转录产物,其中所述的引物选自:
(i)5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.:1>、
(ii)5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.:2>、
(iii)5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.:3>、
(iv)5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.:4>、
(v)5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.:5>、
(vi)5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.:6>、和
(vii)上述任意引物的任意组合物;
(b)扩增所述反转录反应的产物以便产生扩增产物;并
(c)检测所述的扩增产物;
其中对所述扩增产物的检测显示HCV RNA在所述的样品中的存在。
5.一种如权利要求4中所述的方法,其中所述的样品选自血液、血清、血浆、尿、唾液和脑脊液。
6.一种如权利要求4中所述的方法,其中所述的扩增通过选自下列的方法来进行:聚合酶链反应、连接酶链反应、链置换反应、核酸单碱基置换和转录介导的扩增。
7.一种如权利要求4中所述的方法,其中所述的检测通过选自下列的方法来进行:琼脂糖凝胶电泳法、丙烯酰胺凝胶电泳法、比色检测法、ECi检测法、荧光检测法、放射性同位素检测法和化学发光法。
8.一种寡核苷酸,它选自:
5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.:1>、
5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.:2>、
5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.:3>、
5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.:4>、
5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.:5>、
5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.:6>。
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