[发明专利]用于有效反转录丙型肝炎病毒(HCV)RNA的寡核苷酸引物及其使用方法

权利要求书

1.一种用于反转录生物样品中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的方法，该方法包括下列步骤：

(a)在寡核苷酸引导与至少部分所述RNA互补的DNA的合成的条件下，使来源于所述样品的RNA与一种或多种寡核苷酸接触；

其中所述的寡核苷酸选自：

(i)5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.：1>、

(ii)5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.：2>、

(iii)5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.：3>、

(iv)5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.：4>、

(v)5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.：5>、

(vi)5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.：6>、和

(vii)上述任意寡核苷酸的任意组合物。

2.一种如权利要求1中所述的方法，其中所述的样品选自血液、血清、血浆、唾液和脑脊液。

3.一种如权利要求1中所述的方法，还包括(b)回收所述的cDNA的步骤。

4.一种用于检测生物样品中丙型肝炎病毒RNA存在的方法，所述的方法包括下列步骤：

(a)用来源于所述样品的RNA作模板并用与所述RNA中含有的一段序列互补的寡核苷酸作引物来进行反转录反应，从而产生HCV特异性反转录产物，其中所述的引物选自：

(i)5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.：1>、

(ii)5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.：2>、

(iii)5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.：3>、

(iv)5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.：4>、

(v)5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.：5>、

(vi)5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.：6>、和

(vii)上述任意引物的任意组合物；

(b)扩增所述反转录反应的产物以便产生扩增产物；并

(c)检测所述的扩增产物；

其中对所述扩增产物的检测显示HCV RNA在所述的样品中的存在。

5.一种如权利要求4中所述的方法，其中所述的样品选自血液、血清、血浆、尿、唾液和脑脊液。

6.一种如权利要求4中所述的方法，其中所述的扩增通过选自下列的方法来进行：聚合酶链反应、连接酶链反应、链置换反应、核酸单碱基置换和转录介导的扩增。

7.一种如权利要求4中所述的方法，其中所述的检测通过选自下列的方法来进行：琼脂糖凝胶电泳法、丙烯酰胺凝胶电泳法、比色检测法、ECi检测法、荧光检测法、放射性同位素检测法和化学发光法。

8.一种寡核苷酸，它选自：

5’-AGGCCAGTATCAGCACTCTCTGCAGTC-3’(57R27)<SEQ ID NO.：1>、

5’-GTATCAGCACTC-3’(66RT12)<SEQ ID NO.：2>、

5’-AGTATCAGCACTC-3’(66RT13)<SEQ ID NO.：3>、

5’-CAGTATCAGCACTC-3’(66RT14)<SEQ ID NO.：4>、

5’-CCAGTATCAGCACTC-3’(66RT15)<SEQ ID NO.：5>、

5’-GCCAGTATCAGCACTC-3’(66RT16)<SEQ ID NO.：6>。