[发明专利]通过载体核酸增强核酸扩增的特异性

权利要求书

1.一种提高扩增反应中靶核酸扩增特异性的方法，其中扩增反应试剂包含一种或多种特异于靶核酸的寡核苷酸扩增引物、靶核酸、核酸聚合酶和一种或多种镁盐，该方法包括：

(a)制备包含一种或多种寡核苷酸扩增引物和载体核酸的引物/载体混合物，和

(b)并将所述引物/载体混合物与靶核酸、一种或多种镁盐和核酸聚合酶接触。

2.权利要求1所述方法，其中所述载体核酸选自DNA、RNA和肽核酸(PNA)。

3.权利要求2所述的方法，其中所述DNA为牛胸腺DNA。

4.权利要求1所述的方法，其中所述载体核酸以约1至约100μg/ml的浓度存在于所述扩增反应中。

5.权利要求4所述的方法，其中所述载体核酸以约5至约75μg/ml的浓度存在于所述扩增反应中。

6.权利要求1所述的方法，其中在启动扩增反应前，将所述混合物保持在小于约90至约100EC的温度下。

7.权利要求6所述的方法，其中在启动热循环前，保持所述温度。

8.权利要求1所述的方法，其中所述聚合酶包括Taq聚合酶。

9.权利要求1所述的方法，其中所述镁盐包括氯化镁。

10.权利要求1所述的方法，其中所述混合物进一步包含选自抗聚合酶抗体、外切核酸酶、糖基化酶中的一个成员或它们的混合物。

11.一种提高扩增反应中靶核酸扩增特异性的方法，其中扩增反应试剂包含一种或多种特异于靶核酸的寡核苷酸扩增引物，Taq聚合酶和氯化镁，该方法包括：

(a)制备一种引物-载体混合物，它包括一种或多种引物和含有牛胸腺DNA的载体核酸；和

(b)并将所述引物-载体混合物与靶核酸、Taq聚合酶和氯化镁接触；

其中载体核酸在所述扩增反应中的浓度范围为每ml扩增反应体积约1至约100μg。

12.一种在用于扩增靶核酸的反应中降低非靶核酸的聚合酶延伸的方法，其中扩增反应试剂包含一种或多种特异于所述所述靶的寡核苷酸扩增引物、聚合酶和一种或多种镁盐，该方法包括：

(a)制备包含一种或多种扩增引物和载体核酸的寡核苷酸引物-载体核酸混合物，

(b)将该引物-载体混合物与靶核酸、聚合酶和一种或多种镁盐接触。

13.权利要求12所述方法，其中所述载体核酸选自DNA、RNA和肽核酸(PNA)。

14.权利要求13所述方法，其中所述DNA为牛胸腺DNA。

15.权利要求12所述的方法，其中所述载体核酸以约1至约100μg/ml的浓度存在于所述扩增反应中。

16.权利要求15所述的方法，其中所述载体核酸以约5至约75μg/ml的浓度存在于所述扩增反应中。

17.权利要求16所述的方法，其中在启动扩增反应之前，将所述混合物保持小于在约90至约100EC的温度下。

18.权利要求17所述的方法，其中在启动热循环前，保持所述温度。

19.权利要求12所述的方法，其中所述聚合酶包括Taq聚合酶。

20.权利要求12所述的方法，其中所述镁盐包括氯化镁。

21.权利要求12所述的方法，其中所述混合物进一步包含选自抗聚合酶抗体、外切核酸酶、糖基化酶中的一个成员或它们的混合物。

22.一种在用于扩增靶核酸的反应中减少形成引物-二聚体或其它非特异性核酸扩增产物的方法，其中扩增反应试剂包含一种或多种特异于所述靶的寡核苷酸扩增引物、聚合酶和一种或多种镁盐，该方法包括：

(a)制备包含一种或多种引物和载体核酸的引物-载体核酸混合物；和

(b)将该引物-载体混合物与靶核酸、聚合酶和镁盐接触；

其中在将所述引物与一种选自聚合酶、一种或多种镁盐及其混合物的成员接触之前制备所述引物-载体混合物。

23.权利要求22所述方法，其中所述载体核酸选自DNA、RNA和肽核酸(PNA)。