[发明专利]含S(主蛋白)和前S1(大蛋白)乙肝表面基因工程融合抗原的纯化工艺无效
| 申请号： | 00105730.8 | 申请日： | 2000-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN1277206A | 公开（公告）日： | 2000-12-20 |
| 发明（设计）人： | 李军;阮力;陈红;王文;田淑芳;杨芙蓉;宗芳;张陵林 | 申请（专利权）人： | 中国预防医学科学院病毒学研究所 |
| 主分类号： | C07K14/02 | 分类号： | C07K14/02;C12N15/51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白 s1 乙肝 表面 基因工程 融合 抗原 纯化 工艺 | ||
1.一种从表达乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的哺乳动物基因工程细胞系培养液中分离纯化乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的工艺：细胞培养原液→离子交换柱层析→疏水柱层析→分子筛柱层析。
2.根据权力要求1，细胞培养原液是指经离心去除了细胞残渣的含有乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的细胞培养液。
3.根据权力要求1和2，离子交换柱层析的条件为：细胞培养原液直接上样离子交换层析柱，上样液总体积与介质体积比为15∶1，离子交换柱层析介质为DEAE-Sepharose，上样完毕后使用含0.26-0.30M NaCl的20mM磷酸盐缓冲液洗脱杂蛋白A峰，洗至基线后使用含0.39-0.41M NaCl的20mM磷酸盐缓冲液洗脱收集乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白B峰。
4.根据权力要求1，2和3，疏水柱层析的条件为：从相当于疏水柱介质总量50倍的细胞培养原液所获得的离子交换柱层析B峰量，获得的B峰样品在26℃-22℃加硫酸铵调电导至45-48ms/cm后，上样疏水层析柱，疏水层析柱介质为Butty-S-Sepharose 6，上样前先用经硫酸铵在26℃-22℃将电导调至45-48ms/cm的10mM磷酸盐缓冲液平衡柱床，上样完毕后使用同样磷酸盐缓冲液洗脱杂蛋白A峰，洗至基线后使用10mM磷酸盐缓冲液洗脱并收集乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白B峰。
5.根据权力要求1，2，3和4，分子筛柱层析条件为：疏水层析获得的B峰样品超滤浓缩后上样分子筛柱，上样总量为从相当于分子筛柱介质总量8-10倍的细胞培养原液所获得的疏水层析B峰量，上样体积为：分子筛柱介质总量的1/50-1/100，分子筛层析介质为Sepharose 4FF，上样完毕后用含0.15M NaCl的20mM磷酸盐缓冲液洗柱，收集乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白B峰。
6.根据权力要求1，2，3，4和5，分子筛柱层析获得的B峰含乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白，纯度大于95％，回收率大于40％。
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