[发明专利]一种O－唾液酸糖蛋白酶样蛋白及编码它的多核苷酸序列

说明书

本发明公开了分离的O-唾液酸糖蛋白酶样蛋白(以下简称为OSGPLP)基因的多核苷酸序列及其编码的多肽，以及制备这种多肽的方法。本发明也公开了将这种多肽用于多种疾病，如恶性肿瘤、血液病、免疫性疾病和各类炎症等的治疗方法。此外，本发明还公开了通过鉴别OSGPLP的核酸序列中的突变和OSGPLP水平改变，检测与该基因的核酸及其编码多肽异常有关的疾病的诊断方法。本发明还公开了利用本发明多肽筛选该多肽的拮抗剂、激动剂、抑制物的方法，以及制备针对本发明多肽的抗体的方法，也公开了利用本发明基因的多核苷酸序列和多肽及其拮抗剂、激动剂、抑制物和抗体治疗与该基因异常有关的疾病的用途和用于制备用于上述治疗的药物组合物的用途。

O-唾液酸糖蛋白酶被认为是一种特异性水解蛋白质，它可水解肽链上丝氨酸、苏氨酸残基连有唾液酸多糖的蛋白质。K.M.Abdullah等人首次从溶血性巴斯德菌血清型A1中得到gcp基因，其转译蛋白命名为糖蛋白酶或者O-唾液酸糖蛋白内肽酶(E.C.3.4.24.57)。(Alan Mellors等人，1995，酶学方法(Methods.Enzymol.)248；728-740)。O-唾液酸糖蛋白酶是一种金属蛋白酶。高浓度的EDTA使其失去活性，经透析后，酶又恢复活性。推测金属离子可与酶紧密结合(K.M.Abdullah等人，1992，感染与免疫(Infect.Immun.),60:56)。

O-唾液酸糖蛋白内肽酶作用底物一般是细胞表面的糖蛋白，如人红细胞血型糖蛋白A、CD34(骨髓生血干细胞表面抗原)、CD43(leukosialin)、CD44(透明质酸受体)、CD45(白细胞普通抗原)、血小板选择素(P-selectin)反受体、白细胞介素7受体、epitectin(人肿瘤细胞表面抗原)等，通常这类底物细胞外结构域丝氨酸/苏氨酸含量约30％。此类糖蛋白既含有O-多糖，又含有N-多糖，但是O-唾液酸糖蛋白酶只专一水解O-多糖(即：唾液酸)蛋白(Sutherland DR等人，1992年3月1日，免疫学杂志(J.Immunol.),148(5):1458-64)。Clostridium perfringens唾液酸苷酶去除血型糖蛋白A的唾液酸，则破坏糖蛋白对O-唾液酸糖蛋白酶的易感性。推测此酶需要邻近的唾液酸残基结合来完成水解肽链骨架的工作。(K.M.Abdullah等人，1992，感染与免疫，60,56)。

如上所述O-唾液酸糖蛋白酶在调节细胞分裂、胚胎发育、免疫反应等机体重要功能中起重要作用，相信这种调节过程中会涉及大量这类蛋白质。因而本领域中一直需要鉴定更多种类的参与这些过程的O-唾液酸糖蛋白酶，特别是鉴定这些O-唾液酸糖蛋白酶的氨基酸序列。本发明提供了一种新的O-唾液酸糖蛋白酶样蛋白(以下简称为OSGPLP)及其编码基因，为确定进一步明确该类蛋白质在健康和疾病状态下作用的提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。可用于其相关疾病的诊断和治疗。

本发明的目的就是提供一种新的O-唾液酸糖蛋白酶样蛋白及编码它的多核苷酸。本发明的多肽具有O-唾液酸糖蛋白酶样蛋白基因的特征结构域，因而推断本发明的OSGPLP是一种新的这类蛋白质。

本发明涉及一种分离的多肽，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

特别地，所述多核苷酸序列选自：(a)具有SEQ ID NO:1中110-1354位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2058位的序列

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制本发明多肽活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。