[发明专利]生长抑素基因工程体及其活载体疫苗

说明书

本发明生长抑素基因工程体及其活载体疫苗(激生1号疫苗)，属于生物技术高科技研究领域，专用于免疫家畜，通过激素免疫调控，促进家畜生长，提高畜产品产量。

神经内分泌系统在调控动物生长，胴体组成和繁殖性能方面起核心作用。利用外源激素来调节神经内分泌系统，以提高家畜的生产性能和饲料报酬，国内外已有许多报道。最为熟知的是用固醇类和β-激动剂类化合物用以提高家畜生产性能，这就是第一代促生长剂。但此类制剂由于残留问题和对人类健康的影响，而被列为国际禁用。第二代促生长剂为生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，两者均可加速动物生长。目前已开始使用重组GH和IGF-1，但它们的半衰期短，需要连续注射，给生产上应用带来不便，且存在一定的激素残留，而影响使用。第三代的生长促进剂是利用生长抑素(SS)免疫中和调节机理，用化学合成的SS制备的合成肽疫苗主动免疫，或用SS抗血清被动免疫均能中和体内SS，促进内源性GH和IGF-1释放增加，从而促进动物生长。其增重率在5～10％左右，但因SS合成肽疫苗和SS抗血清生产成本都很高，难以推广应用。

本发明的目的是研制一种能有效地促进各种家畜生长，提高饲料报酬、成本低廉而又安全性高，无激素残留，无潜在危险又不降低畜产品质量的基因工程活载体疫苗。

本发明的实施方案如下：

1、生长抑素基因工程体—重组痘苗病毒(vv-HBs/SS)，其构建方法为：

1、1)SS基因合成  SS为14个氨基酸残基组成的短肽，其氨基酸序列和密码子如下：

 1   2   3   4   5   6   7   8   9  10  11  12  13  14

Ala Gly Cys Lys Aan Phe Phe Trp Lys Thr Phe Thr Ser Cys5′-CCT GGC TGC AAG AAC TTC TTC TGG AAG ACT TTC ACA TCC TGT-3′

用380型DNA自动合成仪合成A52和A23 2个两端有酶切位点的SS基因片段：A525′-GGATCCGATGGCTGGCTGCAAGAACTTCTTCTGGAAGACTTTCACATCCTGT

                                     3′-AAGTGTAGGACAATCATTCGAAA-5′

                                                             A23

将2条合成单链摩尔等混合，退火，补齐，即成两端有粘性末端的SS基因，并将其基因克隆于pUC12，获得带SS基因的pUC12-SS质粒；

BamHI       1    2    3    4    5    6    7    8    9    10   11   12   13   14   stop5′-GGATCCG ATG GCT  GGC  TGC  AAG  AAC  TTC  TTC  TGG  AAG  ACT  TTC  ACA  TCC  TGT  TAG TAAGCTTT-3′

 CCTAGGC  TAC CGA  CCG  ACG  TTC  TTG  AAG  AAG  ACC  TTC  TGA  AAG  TGT  AGG  ACA  ATC  ATTCGAA

                                                                                           HindIII

1、2)SS基因与HBsAg融合基因的构建

从带HBs基因的pWR13-HBs/4经改造成PWR13-HBs/6后，从中切下7000bp的HBs基因片段，将其插入pUC₁₂-ss质粒，构建成带HBs/ss嵌合基因的pUC₁₂-HBs/ss质粒；

1、3)HBs/ss表达质粒的构建  将HBs/ss嵌合基因克隆到痘苗病毒表达载体pGJP-5的启动子P7.5之后，获得pGJP-HBs/ss质粒；

1、4)带HBs/ss基因的重组痘苗病毒克隆