[发明专利]一种多重归一化基因扩增方法

权利要求书

1.一种多重归一化基因扩增方法，其特征是，在扩增引物的5′端增加长度为17～25核苷酸的共有引物片段，进行初始扩增，然后用共有引物引发扩增，形成归一化扩增。

2.根据权利要求1所述的多重归一化基因扩增方法，其特征是，所说的初始扩增是指由特异性引物引发的特异基因片段的扩增。

3.根据权利要求1或2所述的多重归一化基因扩增方法，其特征是，所说的归一化扩增是指由共有引物引发的扩增。

4.根据权利要求3所述的多重归一化基因扩增方法，其特征是，优选方法可采用：

(1)三次扩增

①逆转录和初始化扩增；

②第二次扩增；

③第三次扩增；

(2)二次循环法；

(3)一次扩增。

5.根据权利要求4所述的多重归一化基因扩增方法，其特征是，第二次扩增是取初始扩增产物1～2μmol/L，加入反应体系，另加特异引物进行的扩增；第三次扩增是取第二次扩增产物1～2μmol/L，加入反应体系及共有引物进行的扩增；二次循环法中第一循环引物为各0.001～0.01μmol/L，N和RT引物，扩增22～29循环，第二循环引物为0.1～0.3μmol/L，T引物，扩增25～40循环，一次扩增是取引物N和RT 0.001～0.01μmol/L，T为0.1～0.3μmol/L，扩增35～45循环；R为针对目的基因的常规特异性引物，RT为带有共有序列的常规特异性引物，N为位于R和RT之间带有共有序列的常规特异性引物，T为共有引物。

6.根据权利要求5所述的多重归一化基因扩增方法，其特征是，第二次扩增中，另加的特异引物是R和N引物，含0.005～0.05μmol/L的T引物的RT引物。