[发明专利]水稻黄单胞菌hrp基因克隆和hrp基因调节基因

说明书

本发明水稻黄单胞菌hrp基因克隆和hrp基因调节基因，属农业生物技术领域，专用于农业生物技术育种和防治植物病虫害。

水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae)包括两个致病变种：水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，简称Xoo)和水稻细条斑病菌(Xanthomonas oryzae pvoryzicola，简称Xooc)。水稻黄单胞菌hrp(hypersensitive response on nonhost plants andpathogenicity on host plants)基因决定该种病原细菌在非寄主植物(如烟草)上激发过敏反应(hypersensitive response，HR)和在寄主植物水稻(如汕优63)上的致病性(pathogenicity)。水稻黄单胞菌hrp基因成簇(cluster)排列，hrp基因簇调节基因位于hrp基因簇之外。水稻黄单胞菌hrp基因或其调节基因发生突变，则都会改变两致病变种激发非寄主产生HR和在寄主水稻上具致病性的能力。

水稻黄单胞菌既有其致病性，又有其诱导抗病性。水稻黄单胞菌hrp基因可激发非寄主植物产生HR和决定其对寄主水稻的致病性。HR是一种抗病表型。国外已对Erwiniaamylovora、Pseudomonas syringae、Ralstoria solanacearum和Xanthomonas caampestris中的hrp基因以及以据其进行的可能上述研究领域和应用开发领域进行了专利保护，国内仍未见水稻黄单胞菌中hrp基因克隆和hrp基因的报道。

本发明的目的是提供水稻黄单胞菌hrp基因克隆和hrp基因调节基因，用于克隆水稻黄单胞菌或其它植物病原细菌hrp基因和分析水稻黄单胞菌或其它植物病原细菌hrp基因结构与功能，并为用于农业生物技术育种和防治植物病虫害而构建遗传重组体提供基因资源。

本发明所提供的水稻黄单胞菌(X.oryzae)hrp基因包括： 1.水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，简称Xoo)hrp基因克隆pUHRX245   及其亚克隆：(1)Xoo的hrp基因克隆pUHRX245是以载体pUFR034+36.8-kb hrp基因片段构建而成   的。(2)36.8-kb hrp基因片段，经EcoRI酶切后构建于载体pUFR034上形成4个亚克隆   pHRE17、pUHRE13.5、pHRE3.3和pHRE3，分别含17.0、13.5、3.3和3.0-kb DNA   片段；经KpnI酶切后构建形成4个亚克隆pHRK20、pHRK6、pHRK5.8和pHRK3.8，   分别含20、6.0、5.8和3.8-kb DNA片段。(3)13.5-kb片段经BamHI酶切后构建得到pHRB2.3、pHRB5.2和pHRB6三个亚克   隆，所含插入DNA片段分别为2.3、5.2和6.0-kb。(4)6.0-kb片段经SacI酶切后构建成2个亚克隆pHRS2.7和pHRS3.3，分别含2.7-kb   和3.3-kbDNA片段。(5)3.3-kb片段经SacI和KpnI双酶切后构建成2个亚克隆pSK1.1和pSK2.2，分别含   1.1-kb和2.2-kb DNA片段。2.水稻细条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola，简称Xooc)hrp基因克隆   pUHRS138及其亚克隆：(1)Xooc hrp基因克隆pUHR138是以载体pUFR034+39.3-kb hrp基因片段构建而成的。(2)39.3-kb hrp基因片段经EcoRI酶切后构建成3个亚克隆pHRE18.6、pHRE12.3和   pHRE8.4，分别含18.6、12.3和8.4-kb DNA片段；经EcoRI部分酶切后获得pE20.7   亚克隆，含20.7-kb(12.3+8.4-kb)DNA片段。(1)20.7-kb片段经KpnI部分酶切后构建成6个亚克隆pPK12.3、pPK8.4、pHRK6.6、   pHR5.7、pHRK5.2和pHRK3.2，分别含12.3(5.7+6.6-kb)、8.4(5.2+3.2-kb)、6.6、   5.7、5.2和3.2-kb片段。(2)6.6-kb片段经BamHI和KpnI双酶切后构建成2个亚克隆pBK2.1和pBK4.5，分   别含2.1和4.5-kb两个片段。4.5-kb片段上有3个SacI酶切位点和1个EcoRI酶   切位点。