[发明专利]IgGFab－BPI融合蛋白质及其DNA序列

说明书

本发明属于用在抗人体细菌感染的融合蛋白质，即IgG Fab-BPI融合蛋白质，及编码这种融合蛋白质的DNA序列。

抗体LPS mAb一般都具有一定的中和LPS作用(Zigler，J infect Disl988；158(2)：286-290)，但是，由于细菌LPS的种属差异和内源异质性，多数mAb只能中和免疫用LPS和/或与其相近种属细菌的LPS，而且少有保护作用(Mine，Km，Infect Immun 1996；52(1)56-62；Mutharia LM，Ingect Immun1984；45：631-636；Brade L，Infect Immun 1987；55：462-486)。

对于本发明特别有意义的报道之一是用LPS-HDL(脂多糖-高密度脂蛋白)复合物鉴定多株抗LPS mAb的交叉反应性(Heumann D，J Infect Dis.1991；163：762-768)，该研究表明大多数抗LPS mAb缺乏与之的交叉反应性，经调查研究发现，LPS-HDL是不同细菌LPS在人体内代谢的共同产物，纯化的LPS约90％形成LPS-HDL复合物，细菌外膜碎片中50％以上的LPS形成LPS-HDL复合物，完整的细菌外膜和完整的细菌则分别有20％和10％的LPS形成LPS-HDL(焦炳华，《分子内毒素学》，上海科学技术文献出版社1995)。而LPS-HDL依然有完整的LPS致休克和DIC的生物学活性，可见LPS-HDL是内毒素致病的关键因素之一。目前未发现用LPS-HDL制备内毒素抗体的研究。

杀菌/通透性增强蛋白(BPI)是人多形核粒细胞嗜天青颗粒中的一种阳离子蛋白质，具有与细菌LPS结合从而增强革兰氏阴性菌通透性的作用，是十分有效的内源性杀菌物质(Ooi J Biol Chem 1987；262：14891-94)。BPI结合LPS也具有中和游离LPS的作用(Weiss，Blood 1987；69(2)：652-659)。BPI结合LPS的部位在其N-端，精确地说是在第65-99位氨基酸。但其与LPS的结合能力是有限的，即对粗糙型LPS有较好的结合作用，对光滑型的LPS的结合能力则随着LPS特异性多糖链的加长而降低(Elasbach P et al.Basic Principlesand clinical corelates.1992；2：603-636)。

BPI N端因表达产物的分子量约25Kba，半衰期短，需粘附于大分子物质才能较好地发挥作用(Dahlberg PS，et al.J Surg Ras 1996，63(1)：44-48)。

与BPI具有高度同源性的LPS结合人体内存在的蛋白(LBP)是一种可溶性的血液内成分，但其作用是加强LPS的解聚，增强其毒性(Marra M etal.Gritical care Medicine，1994；22(4)：553-564)。从而致使BPI在应用中出现以下情况：LPS攻击小鼠同时注入BPL，保护效率达90-95％；LPS攻击小鼠1小时后注入BPI，保护效率仅50％，2小时后注入，则为0。可见将BPI用于临床实践，尚需克服LBP对BPI的竞争抑制作用，单纯应用BPI不能很好抑制体内毒素对人体侵害。

对于本发明特别有意义的报道之二是重组合成包括抗肿瘤IgG抗原结合部分为融合的第一成分，和以白细胞介素(粘附分子)为第二融合成分的杂交融合蛋白质。Fell HP et al.J Lmmun 1991；146(7)：2446-2452中叙述了IL-2/IgG融合蛋白的合成，其主要目的是以IgG Fab段结合于抗原成份，通过IL-2吸引粘附于单核巨噬细胞，增强单核巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬和杀伤。

对于本发明有特别意义的报道之三，是重组合成包含BPI结合LPS为第一融合成份，和以IgG F_c段为第二融合成分的杂交融合蛋白(专利号NO93109046；Dahberg PS，et al.Arch Surg；1996；131：1173-1177).首先其选用IgG的成份为恒定区，目的是增强单核巨噬细胞等对BPI结合LPS抗原的吞噬作用而不是起中和LPS抗原作用；其次，该IgG虽是一种mAb，其制备不是用LPS-HDL筛选出。所以，其融合蛋白质表达产物不具有广谱、强的中和内毒素和杀菌作用。