[发明专利]中国棉玲虫重组病毒

权利要求书

1.一种对野生型棉铃虫病毒进行遗传改良的中国棉铃虫重组病毒CGMCC0419，其特征是所述的中国棉铃虫重组病毒，其基因组中缺失了egt基因即蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因，在缺失egt基因的位点处，插入由中国棉铃虫病毒多角体蛋白基因启动子控制的昆虫特异性神经毒素AaIT基因和标记基因绿色荧光蛋白GFP基因。

2.一种构建权利要求1所述的中国棉铃虫重组病毒CGMCC0419的方法，包括第一次重组步骤，即

(1)将HaSNPV即中国棉铃虫单核衣壳核多角体病毒的egt基因5’端及上游序列、3’端及下游序列这两个片段，分别克隆到通用载体pBluescriptIIKS^-，

(2)在这两个片段之间插入苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核多角体病毒的多角体蛋白基因启动子控制的绿色荧光蛋白GFP基因，获得重组质粒pHaGFP⁺egt^-，

其特征是再进行第二次重组步骤，即

(3)在重组质粒pHaGFP⁺egt^-的GFP基因与egt基因3’端下游序列之间，插入HaSNPV多角体蛋白基因启动子控制的昆虫特异性神经毒素基因AaIT，得到重组转移载体pHaGFP⁺egt^-AaIT⁺，

(4)将重组转移载体pHaGFP⁺egt^-AaIT⁺与HaSNPV的DNA共转染宿主昆虫细胞，通过等位基因交换，转移载体上位于egt基因5’端部分序列及3’端部分序列之间的AaIT及GFP基因被重组到HaSNPV的egt位点，获得重组病毒体，

(5)经过多轮空斑纯化，得到纯的双重重组病毒HaNPVGFP⁺egt^-AaIT⁺即中国棉铃虫重组病毒CGMCC0419。