[发明专利]中国棉玲虫重组病毒

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是一种能够防治农林害虫棉铃虫和烟青虫的中国棉铃虫重组病毒。

背景技术

目前，杆状病毒已用于农林害虫的生物防治。和其它杆状病毒一样，中国棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera singlenucleocapsid nucleopolyhedrovirus，以下简称野生型病毒或HaSNPV)由于存在杀虫速度慢的缺陷，致使其用于大面积控制棉铃虫危害的作用受到了限制。

基因工程遗传改良被认为是提高病毒杀虫性能的有效途径，为了提高棉铃虫病毒的杀虫速度，本申请人已经通过基因工程的方法构建了缺失蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(EcdysteroidUDP-glucosyltransferase，简称egt)基因的重组棉铃虫病毒--中国棉铃虫病毒基因工程株1号(以下简称工程病毒1号)，并申请了专利(申请号99116683.3；保藏号CGMCC0374)。病毒表达蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶可以介导葡萄糖基与蜕皮激素的结合，降低了宿主体内蜕皮激素的活性，延迟了宿主昆虫的蜕皮时间，增加宿主昆虫的体重，从而达到增殖更多子代病毒的目的。删除病毒的egt基因后，被感染幼虫的激素代谢将发生紊乱，死亡时间将缩短。室内和田间试验结果表明，和野生型棉铃虫病毒相比，尽管工程病毒1号的防治效果已明显改善，但随着近期研究的进展，我们认为先前的工作还可以进一步提高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：在先前工作的基础上，利用基因工程的方法对野生型病毒进行了双重重组，提供一种新型工程病毒--中国棉铃虫重组病毒CGMCC0419，该病毒具有更佳的杀虫效果，可用于棉花、烟草、辣椒等作物上棉铃虫及烟青虫的防治。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是这样的：所提供的中国棉铃虫重组病毒CGMCC0419，其基因组中缺失了egt基因即蜕皮激素尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因，在缺失egt基因位点处，插入由中国棉铃虫病毒多角体蛋白基因启动子控制的昆虫特异性神经毒素AaIT基因和标记基因绿色荧光蛋白GFP基因。该重组病毒是利用基因工程方法对野生型病毒通过二次重组而获得的。

和野生型病毒及工程病毒1号相比，本发明提供的中国棉铃虫重组病毒(简称新型工程病毒)优点突出，具有更快的杀虫速度和更好的田间应用效果。请见附表和图1、图2：生测结果表明，新型工程病毒对二龄棉铃虫幼虫的半致死时间(LT₅₀)比野生型病毒缩短27.6％，比工程病毒1号缩短12.2％。田间试验结果表明新型工程病毒比野生型病毒和工程病毒1号的杀虫速度明显提高。在处理后4天内，新型工程病毒处理的棉铃虫幼虫的累计取食量比野生型病毒处理的幼虫减少65％，比工程病毒1号处理的幼虫减少28.6％。

附图说明

图1是新型工程病毒、工程病毒1号及野生型病毒处理后田间棉铃虫的校正虫口减退率柱形示意图。

图2是新型工程病毒、工程病毒1号及野生型病毒处理后棉铃虫幼虫的累计取食量比较曲线示意图。

图3是新型工程病毒的构建过程示意图。

图4是图3中重组质粒pHaGFP⁺egt^-的构建过程示意图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步说明。

一、图1、图2说明：

1、图1说明：

(1)图例：为野生型病毒；为工程病毒1号；为新型工程病毒；R：校正虫口下降率(％)；T：时间(天)

(2)校正虫口减退率％＝(处理区虫口减退率-对照区虫口减退率)÷(1-对照区虫口减退率)×100

(3)每个处理3个重复，每个小区调查30个棉株，施药前每小区虫口基数均大于30头。统计分析按新复极差测验(SSR测验)：药后3天F＝2.42，药后5天F＝9.78，药后7天F＝10.92。F0.05＝5.14。

2、图2说明：

A：无病毒处理。B：野生型病毒处理。C：工程病毒1号处理。D：新型工程病毒处理。M：累计取食叶面积(mm²)。T：时间(小时)。

二、实施例