[发明专利]乙肝病毒前S1抗原酶联免疫测定试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及免疫诊断试剂，具体涉及一种乙肝病毒前S₁(Pre-S₁)抗原酶联免疫测定试剂盒及制备方法。

长期以来，临床医生是根据“二对半”试剂盒检验结果判断乙肝患者的病情。但是“二对半”试剂查的是与乙型肝炎病毒(HBV)相关的表面和核内抗原和抗体，不是直接查HBV。因此该方法不能确定患者有无HBV。此外，用“二对半”试剂盒检查结果表明全世界约有3亿人为乙肝表面抗原(HbsAg)携带者，我国约有1.3亿，已成为世界之最，但实际上其中的部分人既无临床症状，转氨酶也不高，因此，并非所有HBsAg阳性者都携带HBV。

本发明的目在于克服现有检测HBV的缺陷，研制一种特异性强、简便、灵敏的检测试剂。

本发明提供了一种乙肝病毒前S₁抗原酶联免疫测定试剂盒。该试剂盒是由主要成份为预包被反应条、酶标记前S₁抗体、次要成份为阳性对照液1支、阴性对照液1支，20倍浓洗涤液1瓶、底物缓冲液甲1瓶、底物缓冲液乙1瓶和终止液1瓶组成。

本发明的试剂盒中所述预包被反应条为48～96孔；阳性对照液为HBV-DNA和HBeAg均阳性血清；阴性对照液为正常人血清；底物缓冲液甲为H₂O₂；底物缓冲乙为3,3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)和终止液为4NH₂SO₄。

本发明的乙肝病毒前S1抗原酶联免疫测定试剂盒的临床结果如下：

1993年9月至1994年3月，新华医院、第一人民医院、长海医院、长征医院、海军411医院和北京佑安医院等单位，使用上海新新医学生物工程公司研制、生产的乙型肝炎病毒前S₁(Pre-S₁)蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒，检测各种急、慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后的血清标本，并与常规乙肝病毒免疫标志物(HBV-M)和乙肝病毒DNA(HBV-DNA)进行比较。现将结果总结报告如下。

Ⅰ材料与方法

一、临床血清标本

各医院临床收集血清标本总数为1244份，包括HBV-M有一项以上的阳性标本900份，HBV-M阴性196份，(其中长海48份，市一82份，411医院66份)。

二、实验方法

1、Pre-S₁蛋白检测：按“乙肝病毒前S₁抗原酶联免疫测定试剂盒”说明书进行操作。即取已包被Pre-S₁蛋白单抗条排酶标板，孔内加血清标本50μl，同时设阳性和阴性标准孔；37℃温育30min，弃血清并洗涤三遍后加稀释后的酶标抗Pre-S₁蛋白单抗50μl，置酶标板于37℃温育30min后，弃液并充分洗涤5遍。用TMB底物显色、终止反应，在酶标仪上读波长为450nm处的吸光度值(OD值)。测定孔OD值大于阴性标准孔8倍为阳性。其中LAK细胞治疗前后的阳性配对标本尚计算不同稀释度的P/N比值。

2、HBV-M检测：均采用国产或进口EIA试剂盒检测。

3、HBV-DNA:PCR法。

Ⅱ结果

一、Pre-S₁与HBeAg阳生符合率：以HBeAg为比较参项，219份HBeAg阳性血清中有195份为Pre-S₁阳性，其阳性符合率为89.0％(见表1)。

二、Pre-S₁与HBV-DNA(PCR法)符合率：以HBV-DNA(PCR法)为比较参项，219份HBV-DNA(PCR法)阳性血清中有200份为Pre-S₁阳性，其阳性符合率为91.3％(见表2)。

三、各类HBV感染者Pre-S₁蛋白和HBV-DNA测定结果：海军411医院选择的200份血清标本分为急性乙型肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎和无症状携带者4类。测定结果表明，在急性乙型肝炎，Pre-S₁阳性率达93.3％,HBV-DNA阳性率为96.6％；在慢性活动性肝炎的阳性率分别为33.3％和38.1％。四组之间阳性率比较相差显著(p＜0.01)，急性乙肝和慢活肝组Pre-S₁阳性率分别高于慢迁肝和无症状携带者组(p＜0.01)，而急性乙肝组Pre-S₁阳性率又高于慢活肝组(p＜0.01)。见表3。