[发明专利]壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备

权利要求书

1．壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于以壳聚糖为原料，用醋酸溶液将壳聚糖完全溶解得壳聚糖酸性溶胶，然后在搅拌条件下将壳聚糖酸性溶胶滴入分散介质透平油中，待溶胶均匀分散后，滴入不低于25％的戊二醛溶液，搅拌10～20分钟后，再用NaOH溶液将其pH调至9～10，于60～70℃水浴保温3～5小时，静置冷却后，弃去上层油层，在下层的固形物中先加入石油醚(I)与多余的透平油互溶，弃去上层，然后在下层固形物中加入丙酮与剩下的透平油互溶，弃去上层，然后用无水乙醇抽洗固形物至透平油完全洗净，真空干燥、过60～100目筛，用蒸馏水抽洗除去石油醚(I)、丙酮及无水乙醇，并真空干燥，即得到固定化酶的载体-壳聚糖微球，将壳聚糖微球在pH7.2的磷酸缓冲液中浸泡12～24小时，抽干，将抽干后的壳聚糖微球加入浓度为1～2.5mg/mL的木瓜蛋白酶溶液中，于4～40℃吸附4～24小时，加入0.3～1.5％的戊二醛溶液，使戊二醛溶液与总溶液的最终体积比为0.2～1.0∶100，于4～40℃交联，再用pH7.2的磷酸缓冲液洗去多余的戊二醛溶液并吸干，即制得壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶。

2．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于壳聚糖与醋酸溶液的比例为壳聚糖与醋酸溶液的比例是2～5∶45～100(重量与体积比)。

3．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于壳聚糖酸性溶胶与透平油的比例为1∶2～5(体积比)。

4．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于壳聚糖酸性溶胶与滴入的25％的戊二醛溶液的比例是20～30∶1(体积比)。

5．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于壳聚糖微球与木瓜蛋白酶溶液的比例是0.5～1∶0.6～2(重量与体积比)。

6．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于当木瓜蛋白酶给酶量为1.92mg/g壳聚糖微球时，固定化酶的酶活力和固定化酶的酶活力回收率为最高。

7．根据权利要求书1所说壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于当戊二醛溶液的最终浓度为0.5％时，固定化酶的酶活力与酶活力回收率均达到最大值。