[发明专利]烟草为原料制备辅酶Q10的方法

权利要求书

1．烟草为原料制造辅酶Q₁₀的方法，其特征在于：(1)愈伤组织诱导：取烟草植体，洗净，70％乙醇溶液浸泡，再用0.1％氯化汞溶液消毒，无菌水冲洗除去浸泡液和消毒液，在无菌条件下，切成小块，接种于诱导培养基上，置16-32℃培养箱中黑暗培养至形成愈伤组织；(2)继代培养：将上述愈伤组织转入继代培养基中进行继代培养，产生疏松愈伤组织；(3)悬浮培养出种子细胞：将上述疏松愈伤组织，转入悬浮培养基中培养出种子细胞；(4)辅酶Q₁₀提取：用丙酮作为抽提溶剂，将烟草悬浮培养细胞与丙酮按1∶2(质量/体积比)混合，研磨，过滤，残渣重复2次以上，合并滤液，用0.5倍滤液体积的石油谜(30-65)℃作萃取剂进行萃取，所得石油醚萃取液为辅酶Q₁₀的石油醚提取液；(5)辅酶Q₁₀分离纯化：将石油醚提取液用蒸发法浓缩至原体积的1/15，上硅胶柱用体积分数为4％的乙醚-石油醚浓度混合液线性梯度洗脱，收集黄色部分洗脱液，为辅酶Q₁₀纯化液；(6)结晶：将纯化辅酶Q₁₀溶液于60℃水浴上蒸发除去有机溶剂后，加入无机乙醇溶解，密封于4-8℃冰库中结晶，结晶完全后离心，收集结晶，即为辅酶Q₁₀产品。

2．根据权利要求1所说的烟草为原料制备辅酶Q₁₀方法，其特征在于：愈伤组织培养基以MS为基本培养基，加入BA 1.Smg/L,NAA 1.4mg/L，蔗糖浓度3％，琼脂0.7％，pH6.0，较理想的培养温度为28±1℃。

3．根据权利要求1所说的烟草为原料制造辅酶Q₁₀方法，其特征在于：继代培养基以LS为基本培养基，加入BA 0.05mg/L,2，4-D 1.0mg/L,NAA 1.0mg/L，蔗糖浓度3％，琼脂0.7％，pH5.8。

4．根据权利要求1所说的烟草为原料制备辅酶Q₁₀方法，其特征在于：悬浮培养基中各营养成分为：无机营养LS,KT0.02-4mg/L,2,4-D0.05-4mg/L，肌醇80-800mg/L，盐酸硫胺素0.05-8.0mg/L，酵母膏0.05-0.5％，蔗糖1045％，甲硫酸胺5-20mg/L；各营养成分较佳含量为LS(无机)，KT0.02mg/L,2,4-D2.00mg/L，肌醇100mg/L，盐酸硫胺素4.00mg/L，酵母膏0.15％，蔗糖30％，甲硫氨酸10mg/L。

5．根据权利要求1和4所说的烟草为原料制备辅酶Q₁₀方法，其特征在于：烟草细胞在悬浮培养基的培养条件为：摇床转速100-150转/分钟，最佳转速为100转/分钟，培养基的pH4.0-8.0，最佳的pH5.8，培养温度16-32℃，最佳培养温度为28±1℃，培养时间8天。