[发明专利]采用多种DNA聚合酶的DNA测序方法和所用的试剂盒

权利要求书

1.一种采用双脱氧核苷酸介导的链终止反应的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于，包括：

(i)核苷酸混合物的制备步骤，该混合物同时包含对dNTP的亲和力小于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力高于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶；

(ii)通过将模板DNA连同引物一起加入所述核苷酸混合物中生成DNA片段的步骤；和

(iii)识别按照分子量顺序分离的所述DNA片段的末端碱基以测定模板DNA的核苷酸序列的步骤。

2.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同时包含对dNTP的亲和力不超过对ddNTP的亲和力1000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力不小于对ddNTP的亲和力5000倍的DNA聚合酶。

3.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同时包含对dNTP的亲和力不超过对ddNTP的亲和力0.5倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力不小于对ddNTP的亲和力8000倍的DNA聚合酶。

4.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶。

5.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力1000-5000倍的DNA聚合酶。

6.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力0.5-8000倍的DNA聚合酶。

7.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。

8.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

9.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。

10.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

11.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。

12.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

13.根据权利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。

14.根据权利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

15.根据权利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。

16.根据权利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

17.根据权利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序分离。

18.根据权利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。

19.一种DNA核苷酸测序试剂盒，包括一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP和DNA聚合酶的气密性容器，一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP和DNA聚合酶的气密性容器，一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP和DNA聚合酶的气密性容器，和一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP和DNA聚合酶的气密性容器；其特征在于，所述DNA聚合酶是对dNTP的亲和力小于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力高于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶的混合物。