[发明专利]采用多种DNA聚合酶的DNA测序方法和所用的试剂盒无效
申请号: | 00802714.5 | 申请日: | 2000-11-25 |
公开(公告)号: | CN1336960A | 公开(公告)日: | 2002-02-20 |
发明(设计)人: | 朴韩浯;俞在亨 | 申请(专利权)人: | 株式会社百尼尔 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 中原信达知识产权代理有限责任公司 | 代理人: | 丁业平,王维玉 |
地址: | 韩国忠*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 采用 多种 dna 聚合 方法 所用 试剂盒 | ||
1.一种采用双脱氧核苷酸介导的链终止反应的DNA核苷酸序列分析方法,其特征在于,包括:
(i)核苷酸混合物的制备步骤,该混合物同时包含对dNTP的亲和力小于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力高于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶;
(ii)通过将模板DNA连同引物一起加入所述核苷酸混合物中生成DNA片段的步骤;和
(iii)识别按照分子量顺序分离的所述DNA片段的末端碱基以测定模板DNA的核苷酸序列的步骤。
2.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法,其中核苷酸混合物同时包含对dNTP的亲和力不超过对ddNTP的亲和力1000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力不小于对ddNTP的亲和力5000倍的DNA聚合酶。
3.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法,其中核苷酸混合物同时包含对dNTP的亲和力不超过对ddNTP的亲和力0.5倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力不小于对ddNTP的亲和力8000倍的DNA聚合酶。
4.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法,其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶。
5.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法,其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力1000-5000倍的DNA聚合酶。
6.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法,其中核苷酸混合物还包含对dNTP的亲和力是对ddNTP的亲和力0.5-8000倍的DNA聚合酶。
7.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。
8.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
9.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。
10.根据权利要求2的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
11.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。
12.根据权利要求3的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
13.根据权利要求4的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。
14.根据权利要求4的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
15.根据权利要求5的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序进行分离。
16.根据权利要求5的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
17.根据权利要求6的DNA核苷酸序列分析方法,其中将DNA片段通过电泳按照其分子量顺序分离。
18.根据权利要求6的DNA核苷酸序列分析方法,其中每个DNA片段的末端碱基通过银染色法进行识别。
19.一种DNA核苷酸测序试剂盒,包括一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP和DNA聚合酶的气密性容器,一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP和DNA聚合酶的气密性容器,一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP和DNA聚合酶的气密性容器,和一装有反应缓冲液、稳定剂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP和DNA聚合酶的气密性容器;其特征在于,所述DNA聚合酶是对dNTP的亲和力小于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶和对dNTP的亲和力高于对ddNTP的亲和力3000倍的DNA聚合酶的混合物。
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