[发明专利]干扰细胞内信号发生的合成多肽

说明书

本发明背景

本发明涉及合成来自与Src家族蛋白激酶结合的基元的多肽，以及含有所述多肽的用于治疗癌症和免疫抑制药物。

细胞的许多生物和生理的活化，是由外部信号控制的，这些信号刺激或抑制细胞内的事件。通过这些事件，外部信号传递到细胞中，引起细胞内的反应，此被称为信号传导。在各种细胞外因子(例如，激素、粘连分子、细胞因子等等)的细胞外连接后细胞内的信号传导包括蛋白激酶的活化。为了活化这些分子，最初需要受体-靶目标的相互作用，这些互作激发与另外的分了互作的级联，包括细胞内多途径传递信号事件。

已知有大约400种不同的蛋白激酶，而几年之后，蛋白激酶的总数有可能增加一倍(Hardie G等，(1995)The protein kinase Facts Book，London：Academic)。许多涉及信号传导的蛋白激酶是由多个结构域组成的，其中一些具有催化活性，有些与其他细胞蛋白结合。对于蛋白激酶，初级序列同源性的主要区域存在于催化结构域中，被称为Src同源性1(SH1)，蛋白激酶的SH1结构域可以进一步划分为11个亚结构域，它们不仅为酶所有，而且为所有的蛋白激酶所具有。被发现的下一个最普遍的功能结构域是Src同源性2(SH2)(Sadowski等(1986)，Mol.Cell.Biol.6：4396-4408)和Src同源性3(SH3)结构域。SH2和SH3结构域在细胞信号级联中介导蛋白-蛋白间的互作，并且在Src家族之外的许多蛋白中也被发现。最近，对SH2和SH3结构域在信号传导中结构与功能的广泛研究进行了全面的叙述，这就是pTy-结合(PTB)结构域(P Blaikie等，(1994) J.Biol.Chem.269：32031；ZhouM等，(1995) Nature 92，7784-7788)。

SH2结构域大约有100个氨基酸，能够高亲和地与含磷酸酪氨酸的多肽序列结合，这种含磷酸酪氨酸的多肽序列促进依赖于蛋白修饰的蛋白-蛋白互作(Pawson T等(1992)Cell.70：694-704)。

随后发现，SH2结构域与特定的磷酸化的酪氨酸残基结合，包括Ras GTP酶活化蛋白(GAP)、磷脂酰肌醇3′-激酶(PIK)、以及磷脂酶C-γ(Cantley等，(1991) Cell 64：281-320)。还有，SH2结构域对将这些蛋白定位到活化的受体上起作用，并且参与调节酶的活性(O′Brien等，(1990) Mol.Cell.Biol.10：2855-2862；Roussel等，(1991)Pro.Natl.Acad.Sci.USA 88：10696-10700；Bucker等，(1992)EMBO.J.11：3469-3479)。

已经发现，根据SH2结构域合成的磷酸肽，阻止磷脂酰肌醇3′-激酶与血小板衍生的生长因子(PDGF)受体的结合(Bscobedo等，(1991)Mol.Cell.Biol，11：1125-1132；Fanll等，(1992)Nature 352：726-730)。另外，突变研究表明，磷脂酰肌醇3′-激酶、Ras GAP和PLC-γ的SH2结构域，识别PDGF受体中不同的磷酸肽序列(Bantl等，(1992)Cell69：413-423；Kazlauskas等，(1990)Science 247：1578-1581；(1992)Mol.Cell.Biol.12：2534-2544)。

蛋白激酶之间另一个共同的特点是Src同源性3(SH3)结构域，SH3结构域长度由大约60个残基组成，与富含脯氨酸的肽序列结合，该结构域具有共有序列PXXP(此处，X为疏水氨基酸，如Ile、Leu、Pro、Met、Phe、Tyr)，它具有左手的多聚脯氨酸II型螺旋结构(Feng等，(1994)Seience 266：1241-1247)。SH3结构域与多聚脯氨酶螺旋的结合还促进蛋白-蛋白互作，在确切的亚细胞位置形成有功能的寡聚复合物，所述位置通常是在与其他标准结构域的连接处(Pawson等，(1995)Nature 373：573)。蛋白可以有多个SH3结构域，有可能使几种不同的配体成簇，而且邻近富含脯氨酸配体的Ser或Thr磷酸化可以影响SH3结构域的互作(Chen等，(1996)J.Biol.Chem 271：6328)。有趣的是，在某些事例中，SH3-配体的互作可以被保守酪氨酸的磷酸化负调控(Park H等，(1996)Immunity4：515-525；Broome MA等，(1996)J.Biol.Chem 271：16，798-806)。