[发明专利]新型酶

说明书

技术领域

本发明涉及新型的酶。

技术背景

蛋白酶可被用于多种多样的产业领域。例如，在测定血清中的糖化白蛋白等糖化蛋白时，要使用这种酶，血清中的糖化白蛋白是诊断和治疗糖尿病的重要指标。

应用蛋白酶测定糖化蛋白的方法可如下进行。例如，用蛋白酶水解糖化蛋白，让水解产物与果糖基氨基酸氧化酶(以下称作“FAOD”)反应，通过测定所生成的过氧化氢量或消耗的氧量可知道糖化蛋白质的量。蛋白酶可使用特开平5-192193号公报、特开平7-289253号公报中公开的。

如此，因为预先用蛋白酶处理了糖化蛋白质，上面所讲的FAOD就很容易作用于糖化氨基酸和糖化肽，而对糖化蛋白质自身很难产生作用。尤其是糖化的血红蛋白(以下，计作“HbAlc”)，由于其糖化部分是β链N末端的氨基酸残基，FAOD对这部分的作用很容易，所以要寻求能处理HbAlc的蛋白酶。

发明的公开

本发明的目的是提供上述能处理糖化蛋白质，使FAOD对糖化蛋白质和糖化肽的作用容易的酶。

首先，本发明者们研究了各种FAOD中，对α-氨基键合了糖的糖化蛋白质、糖化肽及糖化氨基酸等起作用的FAOD的作用机制。结果发现，上述FAOD对α-氨基键合了糖的糖化氨基酸作用良好，但对上述糖化蛋白质和糖化肽的作用很难。基于此，本发明者们分离培养了自然界的各种菌，检测了它们产生的酶，结果成功地分离出能从α-氨基(N末端氨基)键合了糖的糖化蛋白质、糖化肽中释放出α-氨基糖化了的氨基酸(α-Glycated Amino acid，以下称作α-GA)的新型酶的生产菌，完成了本发明。因为应用本发明的新型酶(α-Glycated Amino acid Releasing Enzyme，以下称作α-GARE)可以从上述糖化蛋白质和糖化肽中释放出α-GA，所以应用对α-GA发挥优良作用的FAOD进行HbAlc的临床检验等可实用化。除用于HbAlc的测定外，也可在其它糖化蛋白质的测定等不同领域应用。除本发明的促进α-GARE和α-GA释放的机能外，还有其它的催化机能，例如切断其它肽键合的机能。本发明者们分离出的菌体有棒状杆菌属(Corynebacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas)等菌体。本发明的α-GARE不限于来源于这些菌体。

本发明的α-GARE释放的糖化氨基酸，并不特别限定于其α-氨基发生糖化，但如前所述，由于HbAlc的N末端缬氨酸残基发生糖化，所以优选释放的α-GA为糖化的缬氨酸(以下称作α-GV)。

本发明的α-GARE是如下所示的两种类的α-GARE。

首先，一种α-GARE(以下叫做α-GARE-1)是来源于棒状杆菌属(Corynebacterium)的菌体，特别优选来自解脲棒状杆菌KDK1002(Corynebacterium ureolyticum KDK 1002)。该解脲棒状杆菌KDK1002(Corynebacterium ureolyticum KDK 1002)是本发明者们从土壤中分离出的新型菌体，保藏于通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(NIBH)(日本国305-0046茨城县筑波市东1丁目1-3)，保藏号为FERMP-17135(保藏日：平成11年1月11日)。本菌体的菌学特征如下。

(形态特征)

本菌体的现状是大小0.8×1.2μm的杆菌，非运动性。

(培养性质)

让该菌体在普通琼脂培养基上生育时，其菌落的形态是低凸起的圆形，其菌落的颜色为乳白色。

(生理学特性)

革兰氏染色：阳性

氧要求性：厌氧

硝酸盐还原：-

吡嗪酰胺酶：+

吡咯烷基烯丙基酰胺酶：-

碱性磷酸酶：-

β-葡萄糖醛酸酶：-

B-半乳糖苷酶：-

α-葡萄糖苷酶：-

N-乙酰-β-葡萄糖胺酶：-

七叶苷(葡萄糖苷酶)：-

脲酶：+

液化明胶：-

β-溶血性：-

碳水化合物的发酵性：-

葡萄糖：-

核糖：-

木糖：-

甘露醇：-

麦芽糖：-

乳糖：-

白糖：-

糖原：-