[发明专利]识别抗原IORC2的抗体和FV片段

说明书

发明领域

本发明涉及生物技术领域，确切地涉及运用遗传工程技术获得的新型重组抗体，具体地涉及从鼠IOR C5抗体获得的嵌合抗体、人源化抗体和单链Fv片段，它们识别在ior C2抗原中表达的表位，该抗原已被称为在正常与恶性结肠直肠细胞中表达的糖蛋白复合体。

发明背景

已经试验了不同方式的结肠直肠癌疗法，不过时至今日手术仍然是唯一有疗效的方案。如果能在初期发现肿瘤，手术可以获得较高的存活率，然而不幸的是大多数病案都是在肿瘤已经转移之后才得到确诊的。

当前，在癌尚未扩散到器官的外层部分、仍然可以通过外科手术治愈肿瘤的阶段，提高存活率的方法包括诊断、治疗和流行病学。这样，流行病学方面的知识以及新的治疗方法的发展将有助于提高存活率。

近年来，开始通过免疫γ射线照相法运用由放射性同位素做标记的单克隆抗体(Mab)或者是它们的片段来对癌症进行检测。单克隆抗体已经表现出了作为放射性同位素载体和靶向于相关肿瘤抗原的潜力。

部分做过放射性标记的抗体已经被用来检测与癌胚抗原(CEA)有关的肿瘤。用I-131或I-125做过标记的针对CEA的抗体被用于检测产生CEA或者与此标记有关的肿瘤(美国专利No.3663684、No.3867363和No.3927193)。同样，Mab也可以用Tc-99m做标记以获得进行“体内”诊断所用的分子。

由Khler和Milstein开发的杂交瘤抗体技术给免疫化学学科带来了革命性的变化，同时提供了在疾病的研究和临床诊断上都有广阔应用前景的一组新试剂(Khler G；Milstein C.(1975)《自然》256，495-497)。这些抗体没有表现出很强的治疗效果，而尽管生产鼠单克隆抗体(mAbs)用于基础研究和临床诊断已经成为一种例行程序，使用这些抗体用于“体内”免疫疗法是很困难的。这是因为在人体内这些抗体具有缩短了的半寿期，而且人体的免疫系统很难识别鼠抗体的效应域，还因为外来的免疫球蛋白能够引发一种抗球蛋白应答(HAMA应答)，可能会干扰治疗。

基因工程的发展为遗传法操纵抗体基因、从而产生在用于某些病理治疗或诊断时抗原性低或者无抗原性且所需要的效应器功能也得到了增强的mAb的能力带来了革命性的变化。这些操纵提供了一种备择方案，其中能够把鼠mAb转化为主要为人的形式，同时保持相同的抗原结合特征(Morrison S.L等1984，P.N.A.S.USA，81，6851-6855)。

最近又开发了一些方法，旨在把鼠或大鼠抗体人源化，并使其在人体中应用时降低对外来蛋白质的异种应答。

降低抗原性的初衷之一是为了生产“嵌合”抗体。在这些分子中，可变域被插入到人构架之中，这样不但可以降低免疫原性，还可以改善效应器功能，这是因为它们具有人源化的形式，因而可以被免疫系统识别(Morrison S.L等(1984)P.N.A.S，USA81，6851-6855)。这些嵌合分子保持了对原始抗原的识别，而且尽管它保持了对鼠抗原可变区的免疫原性，其恒定区不是免疫原性的。

其他作者试图通过从一个鼠抗体中仅移植抗原结合位点，而不是整个可变域来在人体抗体中直接建立一个啮齿类动物抗原结合位点(Jones P.T等(1986)《自然》321，522-524，VerhoeyenM等(1988)《科学》239，1534-1536)。Rietchmann已经发展了该方法的一些应用(Rietchmann L.等(1988)《自然》332，323-327；Queen C.等(1989)P.N.A.S.USA86，10029-10033)，不过为了恢复对原始抗原的亲和性，其他作者研究的是重构抗体，其中包括人FR中的某些鼠残基(Tempest，P.R.(1991)《生物技术》9，266-272)。

Mateo等人(美国专利No.US 5712120)描述了降低鼠抗体的免疫原性的一种方法。该方法中所作的修饰被限制在可变域中，具体说来被限制在嵌合抗体的鼠构架中。而且，这些修饰只在带有两亲性螺旋结构的FR区中进行，因此是被T细胞所识别的潜在表位。此方法提出用在人免疫球蛋白中处于相同位置的氨基酸取代两亲性区中的鼠残基。当然，在结合位点的三维结构中涉及到的氨基酸，也就是说游标区，CDR的规范结构的氨基酸以及在轻链和重链之间界面的氨基酸要排除在外。