[发明专利]人肝脏祖先

权利要求书

1.一种提供包含源自人肝脏组织之细胞混合物的组合物的方法，其中所述的混合物包含人肝脏祖先的富集群，该方法包括：

(a)提供人肝脏组织的基本上是单细胞的悬浮液，所述的肝组织含有包括未成熟和成熟细胞在内的不同大小细胞的混合物；以及

(b)在可以去除成熟细胞和那些相对较大细胞、而同时保留未成熟细胞和那些相对较小细胞的条件下，缩小悬浮液的体积，

以提供包含人肝脏祖先富集群的细胞混合物，其中人肝脏祖先本身、它们的后代或者其更成熟形式显示一种或多种表示甲胎蛋白、清蛋白或二者表达的标志。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述的肝脏组织得自胎儿、新生儿、婴儿、儿童、青少年或成年个体。

3.如权利要求1所述的方法，其中未成熟细胞的直径小于约15μ。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述的富集群含有人二倍体全肝脏细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述的肝脏祖先为肝祖先、造血祖先、间充质祖先或其多种混合物。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述的甲胎蛋白为全长甲胎蛋白。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述的缩小体积处理包括根据细胞的大小、浮力密度或其组合而进行的分离。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述的缩小体积步骤包括离心式淘洗、密度梯度离心、淘选、亲和层析、荧光标记、流体反向流动、连续流式离心、区带离心、磁珠的使用或其多种组合。

9.如权利要求1所述的方法，进一步包括成熟细胞的选择性裂解。

10.如权利要求1所述的方法，进一步包括选择这样的细胞，这些细胞本身、它们的后代、或其更成熟形式显示一种或多种指示甲胎蛋白、清蛋白或二者表达的标志。

11.一种采用权利要求1所述的方法分离的人肝脏祖先。

12.一种提供包含人肝脏祖先富集群的组合物的方法，包括：

(a)提供人肝脏组织的基本上是单细胞的悬浮液，和

(b)对该悬浮液进行正的或负的免疫选择。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述的肝脏祖先为肝祖先、造血祖先、间充质祖先或其多种组合。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述的免疫选择包括选择这样的细胞，它们表达与造血细胞相关的标志、表达与肝脏细胞相关的标志、表达与间充质细胞相关的标志或其多种组合。

15.如权利要求12所述的方法，其中所述的免疫选择包括从悬浮液选择这样的细胞，这些细胞本身、它们的后代或者其更成熟形式显示一种或多种指示甲胎蛋白、清蛋白或二者表达的标志。

16.如权利要求15所述的方法，进一步包括选择这样的细胞，这些细胞本身、它们的后代或者其更成熟形式产生全长甲胎蛋白mRNA。

17.如权利要求12所述的方法，其中所述的免疫选择包括从悬浮液选择表达成年肝细胞特异的标志的细胞。

18.如权利要求12所述的方法，其中所述的免疫选择包括选择这样的细胞，这些细胞本身、它们的后代或者其更成熟形式表达CD14、CD34、CD38、ICAM、CD45、CD117、血型糖蛋白A、连结蛋白32、骨桥蛋白、骨骼唾液蛋白、I型胶原、II型胶原、III型胶原、IV胶原型或其多种组合。

19.如权利要求12所述的方法，其中所述的免疫选择包括选择这样的细胞，这些细胞本身、它们的后代或者其更成熟形式进一步地表达甲胎蛋白样免疫反应性、清蛋白样免疫反应性或其组合。

20.一种采用权利要求14中所述的方法分离的人肝脏祖先。

21.一种包含人肝脏祖先、它们的后代或者其更成熟形式的富集群的组合物，其中人肝脏显示一种或多种指示甲胎蛋白、清蛋白或二者表达的标志。

22.如权利要求21所述的组合物，其中所述的祖先包括肝祖先、造血祖先、间充质祖先或其多种组合。