[发明专利]包含功能性以及非功能性剪接供体位点和剪接受体位点的反转录病毒载体

说明书

本发明涉及一种载体。

具体地说，本发明涉及一种用于包装并表达反转录病毒颗粒中的遗传物质的新型系统。

更具体地讲，本发明涉及能够表达反转录病毒颗粒的新型系统，它能够将目的核苷酸序列(下文缩写为“NOI”)-甚至多个NOI-传递至一个或多个靶位点。

另外，本发明特别涉及可用于基因治疗的新型反转录病毒载体。

基因治疗可以包括以下的任何一种或多种形式：例如在一个或多个靶位点诸如靶细胞中对一种或多种核苷酸序列进行添加、取代、缺失、补充、操作等。如果所述靶位点为靶细胞，则所述细胞可以为组织或器官的组成部分。关于基因治疗的的一般认识可参见MolecularBiology(编辑Robert Meyers，Pub VCH，例如第556-558页)。

作为再一实例，基因治疗也可以提供用于以下任何一种或多种目的的方法：可以应用诸如基因的核苷酸序列取代或补充缺陷基因；可以消除诸如基因的致病核苷酸序列或其表达产物；可以添加或导入核苷酸序列例如基因或其表达产物，以便例如产生更合适的表型；可以添加或导入核苷酸序列例如基因或其表达产物，例如用于选择目的(即相对于非转化细胞选择转化细胞等)；可以在分子水平上操作细胞，以治疗、治愈或预防疾病病症-诸如癌症(Schmidt-Wolf和Schmidt-Wolf，1994，Annals ofHematology 69，273-279)或其它疾病病症，诸如免疫疾病、心血管疾病、神经病、炎症性疾病或传染病；可以操作和/或导入抗原以激发免疫应答，诸如基因疫苗接种。

近年来，已经提出将反转录病毒用于基因治疗。本质上反转录病毒是生活周期不同于裂解病毒的RNA病毒。在该方面，反转录病毒是通过DNA中间体复制的感染体。当反转录病毒感染细胞时，其基因组由反转录酶转变为DNA形式。以所述DNA拷贝作模板产生新的RNA基因组和装配感染性病毒颗粒所必需的病毒编码蛋白。

有许多反转录病毒，实例包括：鼠白血病病毒(MIV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)、弗吉纳米肉瘤病毒(FuSV)、莫洛尼鼠类白血病病毒(Mo-MLV)、FBR鼠类骨肉瘤病毒(FRB MSV)、莫洛尼鼠类肉瘤病毒(Mo-MSV)、艾贝尔逊鼠类白血病病毒(A-MLV)、鸟类髓细胞瘤病病毒-29(MC29)和鸟类成红细胞增生病毒(AEV)。

在Coffin等(“Retroviruses”1997 Cold Spring Harbour Laboratory Press编辑：JM Coffin，SM Hughes，HE Varmus第758-763页)的著作中，可以找到详细的反转录病毒一览表。

在本领域中可以找到关于某些反转录病毒基因组结构的详细介绍。例如可以从NCBI Genbank中找到关于HIV的详细介绍(即基因组登记号AF033819)。

所有野生型反转录病毒基本上均含有三种主要的编码域-gag、pol、env，它们编码必需的病毒体蛋白。然而，反转录病毒可以大致分为两类：即“简单型”和“复杂型”。这两类的区别在于其基因组结构。简单型反转录病毒通常仅携带基本信息。相比之下，复杂型反转录病毒还编码多重剪接信息产生的其它调节蛋白。

反转录病毒甚至可以进一步分为7组。其中5组为具有致癌潜力的反转录病毒。其余2组是慢病毒和泡沫病毒。关于这些反转录病毒的综述参见“Retroviruses”(1997 Cold Spring Harbour Laboratory Press编辑：JM Coffin，SM Hughes，HE Varmus第1-25页)。

除人T细胞白血病病毒-牛白血病病毒群(HTLV-BLV)外的所有致癌成员均为简单型反转录病毒。HTLV、BLV和慢病毒以及泡沫病毒是复杂型反转录病毒。研究得最清楚的一些致癌反转录病毒是劳斯肉瘤病毒(RSV)、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)和鼠类白血病病毒(MLV)和人T细胞白血病病毒(HTLV)。

慢病毒群甚至可再分为“灵长类”和“非灵长类”慢病毒。灵长类慢病毒的实例包括人免疫缺陷病毒(HIV)(即人自身免疫缺陷综合征(AIDS)的致病因子)和猿猴免疫缺陷病毒(SIV)。非灵长类慢病毒群包括原型“慢病毒”维斯那/梅迪病毒(VMV)以及相关的山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)、马传染性贫血病毒(EIAV)和新近描述的猫免疫缺陷病毒(FIV)和牛免疫缺陷病毒。