[发明专利]用于治疗IL－18介导疾病的重组IL－18拮抗物

说明书

发明领域

本发明涉及诊断和治疗IL-18介导疾病的抗体和修饰抗体，更具体地是单抗，Fab，嵌合及人源化抗体。

发明背景

人白细胞介素-18近来被鉴定为一种细胞因子，它是作为无生物活性的193氨基酸前体蛋白被合成的(Ushio等，J.Immunol.156：4274，1996)。受caspase-1或caspase-4作用，前体蛋白裂解，释放出156氨基酸的成熟蛋白(Gu等，Science 275：206.1997：Ghayur等，Nature 386：619，1997)，其生物活性包括共同刺激T细胞增殖，增强NK细胞的细胞毒性，诱导NK细胞和T细胞产生IFN-γ，和加强T辅助细胞1(Th1)分化(Okamura等，Nature378：88，1995；Ushio等，J.Immunol.156：4274，1996；Micallef等，Eur.J.Immunol.26：1647，1996；Kohno等，J.Immunol.158：1541，1997；Zhang等，Infect.Immunol.65：3594，1997；Robinson等，Immunity 7：571，1997)。此外，IL-18高效诱导人单核细胞促炎介体，包括IL-8，肿瘤坏死因子α(TNF-α)和前列腺素E2(PGE2)(Ushio，S.等，J.Immunol.156：4274-4279，1996；Puren，A.J.等，J.Clin.Invest.10：711-721，1997；Podolin等，J.Immunol.submitted，1999)。

此前克隆的IL-1受体相关蛋白(IL-1 Rrp)(Parnet等，J.Biol.Chem.271：3967，1996)近来被鉴定为IL-18受体(Kd＝18nM)(Torigoe等，J.Biol.Chem.272：25737，1997)的一个亚基。IL-18受体的另一个亚基与IL-1受体辅助蛋白具有同源性，并称为AcPL(辅助蛋白类)。IL-18诱导的NF-κB和JNK激活需IL-1 Rrp和AcPL二者的表达(Born等，J.Biol.Chem.273：29445，1998)。除NF-κB和JNK外，IL-18信号也可经IL-1受体相关激酶(IRAK)，p561ck(LCK)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)(Micallef等，Eur.J.Immunol.26：1647，1996；Matsumoto等，Biophys Biochem.Res.Comm.234：454，1997；Tsuji-Takayama等，Biochem.Biophys.Res.Comm.237：126，1997)传递。

产生促炎细胞因子如IFN-γ，IL-2和TNF-β(Mosmann等，J.Immunol.136：2348，1986)的Th1细胞参与介导许多自身免疫疾病，包括多发性硬化(MS)、类风湿关节炎(RA)、I型或胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、炎性肠病(IBD)和牛皮癣(Mosmann and Sad，Immunol.Today 17：138，1996)。因此，预期促Th1细胞因子如IL-18的拮抗将抑制疾病发展。IL-18特异单抗可用作拮抗物。

IL-18在自身免疫疾病发展中的作用已证实。相应地，证实了非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠发病前，胰脾中IL-18表达迅速而显著增加(Rothe等，J.Clin.Invest.99：469，1997)。类似地，已表明类风湿关节炎病人滑液中IL-18水平明显升高(Kawashima等，Arthritis and Rheumatism 39：598，1996)。进而证实服用IL-18加重实验小鼠变态反应性脑脊髓炎(EAE)的临床症状，EAE是一种Th1介导的自身免疫疾病，为多发性硬化模型。此外，已表明中和抗大鼠IL-18抗血清可预防雌路易斯大鼠患EAE(Wildbaum等，J.Immunol.161：6368，1998)。由此，IL-18是发展自身免疫新疗法的理想靶标。

Taniguchi等，J.Immunol.Methods 206：107记述了7个小鼠和6个大鼠抗人IL-18单抗，它们结合于4个不同的抗原位点。一个小鼠单抗(#125-2H)和6个大鼠单抗抑制IL-18诱导KG-1细胞产生IFN-γ，这些大鼠单抗的中和活性比#125-2H低10倍。如蛋白质印迹分析显示，3个小鼠单抗但无一大鼠单抗，与膜结合人IL-18强烈反应。此外，还记述了用#125-2H和大鼠单抗检测人IL-18的酶联免疫吸附实验(ELISA)。