[发明专利]用作TNF－α信号传导途径抑制物的TRAF2变体

说明书

发明领域

肿瘤坏死因子α(TNFα)是多种细胞产生的免疫应答中的细胞间递质，包括活化的巨噬细胞和单核细胞。由TNFα激发的应答通过它与两个独特的TNFα细胞表面受体：TNFαR1和TNFαR2之间的相互作用启动。TNFα与这些细胞表面受体结合并激发转录因子的活化，例如，核因子κB(NFκB)，它们调节多种免疫和炎性应答基因的表达。

凭借TNFα的结合，TNFα受体通过它们的胞质结构域与多种细胞内信号翻译蛋白质相互作用。已知与TNFα受体相关的一组细胞内信号翻译蛋白质是肿瘤坏死因子受体相关因子，即已知为受体蛋白的“TRAF”家族。TRAF家族由许多具有共同结构特征的同源蛋白质组成，它们与TNFα受体蛋白相联系并从中传导信号。TRAF蛋白缺少酶促活性基元，而似乎显示接头蛋白质的功能，它可将载体偶联至下游信号传导级联中。该家族的一个成员，TRAF2，与许多TNFα受体家族蛋白质相联系，包括TNFαR1、TNFαR2、CD40和CD30。对于TRAF2，已鉴定至少有8个细胞内分子与其直接结合。TRAF2已显示出对于TNFα介导的各种转录因子的活化是关键的，尤其是对NFκB和C-jun N-末端激酶(JNK/SAPK)，这些转录因子依次负责免疫/炎性应答的表达。

有多种疾病与受TNFα结合控制的所调节途径有关系。在某些情况下，TNFα结合激发了最终导致疾病的炎性应答。因此，需要开发预防与TNFα受体结合相关的疾病的方法。尤其期望找到预防炎性应答激活的方法，所述应答原本会被TNFα的激活所引发。为了治疗和预防与TNFα结合相关的疾病，本发明提供了以TRAF2为基础并能抑制TNFα信号传导途径的多肽。

                   已报道的进展

TRAF蛋白的一般结构已被描述并在图1(a)中进行了大致说明，该图显示了图表形式的全长TRAF2(TRAF-FL)。这些蛋白质具有带锌环指基元的N-末端区，随后是一列类锌指结构。锌指区之后是由两个亚结构域组成的保守(TRAF)结构域：N-末端结构域和C-末端结构域。C-末端结构域涉及受体的结合和TRAF的同源及异源寡聚化作用，它是各种其它信号传导蛋白质的停泊位点。

TRAF2遵循上述TRAF蛋白质的一般结构。已有许多研究试图将TRAF2蛋白质结构的亚结构域与该蛋白的功能相联系起来。

Takeuchi等对TRAF2进行了广泛的突变分析(Takeuchi等，生物化学杂志J.Biol.Chem.，271(33)19935-42(1996))。这些研究显示TRAF2由介导独特活性的模块化结构域组成。作者确定TRAF2的N-末端环指及两个相邻的锌指是NFκB激活所需要的，而TRAF结构域中的独特的TRAF-N和TRAF-C亚结构域看来是独立介导自身结合及其与TRAF1的相互作用。

Song等(美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，94，9792-9796(1997))随后的研究显示TNFα诱导的NFκB及c-jun N-末端激酶(JNK/SAPK)活化需要TRAF2。作者显示，TRAF2是两激酶级联反应导致NFκB和JNK激活的分支点。此报告支持了TRAF2及TRAF家族其它成员作为接头蛋白质的功能性模型，其中具有起始平行下游应答之附加信号蛋白质的停泊位点。

Min等(免疫学杂志(J.Immunology)，159，3508-3518(1997))用转染/过表达的策略来分析TRAF蛋白质的作用。先前已显示含TRAF结构域但缺少氨基末端残基1-80的TRAF2可抑制TNFα诱导NFκB的活化。作者证实此TRAF2变体还阻断TNFα对JNK的激活作用。

Brink等(生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，273，7，4129-4134(1998))描述了一种TRAF2的剪接变体，他们称之为“TRAF2A”。TRAF2A的cDNA除了具有附加的21bp序列外，其余部分与TRAF2相同，此21bp序列编码的7个氨基酸插入TRAF2A环指结构域中。作者发现TRAF2AmRNA的表达以组织特异的方式被调节，且TRAF2A蛋白能与TNFαR2的胞质结构域结合。他们还发现，与TRAF2相反，当TRAF2A在293细胞中过表达时，它不能刺激NFκB活性，而是充当TNFαR2依赖型NFκB活化的主要抑制物。