[发明专利]α－糖化氨基酸释放酶

说明书

技术领域

本发明涉及新型酶，具体地说，本发明涉及促使α-氨基糖化的氨基酸释放的新型酶。

背景技术

蛋白酶普遍应用于各种产业领域。例如，在测定作为糖尿病的诊断及治疗中重要指标的血清中的糖化白蛋白等糖化蛋白质时使用了上述蛋白酶。

这种利用蛋白酶的糖化蛋白质的测定方法，可如以下所示来进行。例如，用蛋白酶分解糖化蛋白质，该分解物与果糖基氨基酸氧化酶(以下，略作FAOD)进行反应，通过测定生成的过氧化氢量或消耗的氧量得知上述糖化蛋白质的量。作为上述蛋白酶使用了特开平5-192193号公报、特开平7-289253号公报等报道的蛋白酶。

类似与此，预先用蛋白酶处理糖化蛋白质是由于上述FAOD等易作用于糖化氨基酸或糖化肽，而难作用于糖化蛋白质本身。尤其是糖化血红蛋白(以下，略作HbAlc)，由于其糖化部分是β链N末端的氨基酸残基，所以为使FAOD易作用于这一部分，需要一种可处理HbAlc的蛋白酶。

发明内容

由此，本发明的目的是提供可处理上述糖化蛋白质等的新型酶，以使FAOD易作用于糖化蛋白质或糖化肽等。

首先，本发明人等在各种FAOD中，尤其对作用于糖结合在α-氨基的糖化蛋白质、糖化肽及糖化氨基酸等的FAOD，研究了其作用机制。由其结果可知，上述FAOD，例如虽可有效作用于α-氨基结合糖的糖化氨基酸，但难作用于上述糖化蛋白质或糖化肽。因此，本发明人等在这一认识的基础上，分离培养了自然界的多种菌体，并对这些菌体产生的酶进行了研究。其结果为，成功地分离出一系列菌体，这一系列菌体可产生促使糖结合在α-氨基(N末端氨基)的糖化蛋白质或糖化肽释放α-氨基糖化的氨基酸(α-糖化氨基酸，以下略作α-GA)的新型酶，进而完成了本发明。根据本发明的新型酶(α-糖化氨基酸释放酶，以下略作α-GARE)，例如可使上述糖化蛋白质或糖化肽释放α-GA，因此可利用有效地作用于α-GA的上述FAOD来进行HbAlc的测定，并且在临床检验等方面可将该测定方法实用化。而且，除了HbAlc的测定以外，在其他糖化蛋白质的测定等多个领域也可广泛应用。此外，本发明的α-GARE除了具有促使α-GA释放的酶促功能以外，还可具有其他酶促功能，例如可具有切断其他肽键的功能等。作为本发明人等分离的新菌体，如鞘氨醇杆菌属(sphingobacterium)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、毛霉属(Mucor)、青霉属(Penicillium)等的菌体。此外，本发明的α-GARE并不受限于这些菌体来源。

对于本发明的α-GARE，释放的糖化氨基酸只要是其α-氨基被糖化的话，就没有特殊的限制。但如上所述，因HbAlc的N末端缬氨酸残基被糖化，优选上述释放的α-GA为糖化缬氨酸(以下，略作α-GV)的α-GARE。

作为本发明的α-GARE，例如以下所示的、5种类型的α-GARE。

首先，第一种α-GARE来源于鞘氨醇杆菌属的菌体，特别优选来源于水氏鞘氨醇杆菌KDK1003(Sphingobacterium mizutaeKDK1003)的α-GARE。该水氏鞘氨醇杆菌KDK1003是本发明人等从土壤中筛选、分离到的新型的菌体，并保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(NIBH)(日本国305-8566茨城县筑波市东1丁目1-3)，保藏编号FERM P-17348(保藏日期：1999年3月29)。本菌体的细菌学特性如下所示。(形态上的特性)

本菌体的形状是大小为0.5×1.2μm的杆菌，并且是非运动性的。(培养的性质)

在常规的琼脂培养基上培养本菌体时，其菌落形态为低矮的、凸起状的边缘光滑的圆形，上述菌落的颜色为黄色。(生理学性质)

革兰氏染色性：                                      阴性

需氧性：                                      兼性厌氧型

硝酸盐还原试验：                                   -

吲哚生成试验：                                     -

葡萄糖酸性化：                                     -

精氨酸二氢化酶：                                   -