[发明专利]反转录酶分析试剂盒及其使用以及用于在生物样品中进行RT活性分析的方法

权利要求书

1.反转录酶(RT)分析试剂盒，该试剂盒含有一个或者几个包装，这些包装固相结合的多聚核糖腺苷酸(prA)和/或多聚脱氧腺苷酸(pdA)模板，该模板通过使一种基于聚苯乙烯的固相同一种含有1-甲基咪唑的偶联溶液以及prA和/或pdA相接触并随后进行温育、以洗涤缓冲液进行洗涤、干燥和包装来获得，该试剂盒还含有对RT类型进行适配的分隔包装的分析组分，这些组分选自由缓冲液，二价金属离子、螯合剂、多胺、RNA酶抑制剂、还原试剂、盐、稳定化试剂和去污剂单独组分或其混合物，以及冻干的脱氧核苷酸三磷酸、引物、保护试剂和浓缩的洗涤缓冲液单独组分或其混合物，根据情况还含有冻干的参照酶和一种检测系统的组分，该检测系统含有冻干的偶联有碱性磷酸酶的抗BrdU单克隆抗体、碱性磷酸酶底物缓冲液以及碱性磷酸酶底物组成的组，以及

该试剂盒的书面使用说明书。

2.权利要求1的RT分析试剂盒，其中该固相为一种微滴定板并且向各孔内加入了一份偶联溶液，该溶液含有100mM 1-甲基咪唑，以及0.5-2mg/ml prA和/或pdA，随后在10-60℃下温育0.5-10小时，以洗涤缓冲液洗涤各孔以除去1-甲基咪唑并且干燥并包装该平板，该洗涤缓冲液含有Bis-Tris丙烷，

3.权利要求2的RT分析试剂盒，其中向各孔内加入了100μl偶联溶液，该溶液含有100mM 1-甲基咪唑，以及1mg/ml prA和/或pdA，随后在室温下温育2小时，以2×300μl洗涤缓冲液洗涤各孔并且在37℃下干燥该平板25分钟并在箔中包装该平板并且进行真空密封包装，该洗涤缓冲液含有10mM Bis-Tris丙烷，

4.权利要求1-3其中之一的RT分析试剂盒，其中该分析组分选自该分析组分选自由Tris和Hepes缓冲液，、二价金属离子Mg²⁺和Mn²⁺，螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)和乙二醇双(β-氨基乙醚)N，N，N’，N’-四乙酸(EGTA)以及多胺，精胺和亚精胺、RNA酶抑制剂硫酸肝素和硫酸葡聚糖、还原试剂二硫苏糖醇(DTT)和二硫赤藓醇(DTE)，谷胱甘肽、盐NaCl和KCl、稳定化试剂新生小牛血清(NCS)和牛血清白蛋白(BSA)、去污剂吐温-20和Triton X-100、脱氧核苷酸三磷酸BrdUTP、引物寡聚dT，以及保护性试剂ATP、GTP和CTP组成的群体。

5.权利要求1-4其中之一的RT分析试剂盒对于在生物样品中的定性和定量分析的应用。

6.权利要求5的应用，其中该生物样品选自生物液体或细胞抽提物。

7.权利要求6的应用，其中该生物液体选自由血浆、血清、脊髓液、滑膜液和胸膜液组成的群体。

8.权利要求5-7其中之一的应用，在该应用之后根据该RT活性的分析结果进行了对与紊乱或疾病相关的RT活性水平的评估。

9.在生物样品中进行RT活性的定性和定量分析的方法，该方法包括的步骤有使用和遵循权利要求1-4其中之一的RT分析试剂盒的书面说明书来进行在生物样品中的RT活性检测。

10.权利要求9的方法，其中该生物样品选自生物液体或细胞抽提物。

11.权利要求10的方法，其中该生物液体选自由血浆、血清、脊髓液、滑膜液和胸膜液组成的群体。

12.权利要求9-11其中之一的方法，在该方法之后根据该RT活性的分析结果进行了对与紊乱或疾病相关的RT活性水平的评估。