[发明专利]反转录酶分析试剂盒及其使用以及用于在生物样品中进行RT活性分析的方法

说明书

本发明涉及到一种反转录酶(RT)分析试剂盒，该试剂盒用于在生物样品中进行RT活性分析。本发明还涉及到一种方法以及该RT试剂盒在生物样品中进行RT定性和定量分析中的应用，可根据情况在该分析之后进行与紊乱或疾病相关的RT活性状况的评估，该评估可根据该RT活性分析的结果进行。

发明背景

在包括人类免疫缺陷病毒(HIV)在内的所有反转录病毒中，对于其进行的从病毒RNA合成DNA，反转录酶(RT)是一种关键性的酶(Baltimore-70，Temin-70，Barre-Sinoussi et al-83)。这一过程涉及到三种酶活性：第一条DNA链的合成，DNA/RNA杂合体中的病毒RNA的降解以及第二条链的合成(综述见Goff)。

反转录病毒可以以外生和内生形式存在。其主要的区别在于内生的反转录病毒已经进入了胚系并且由此而存在于该生物体的所有的细胞中，与之相比，外生的反转录病毒只能进入具有该特定病毒的适当受体的细胞。人类中的内生反转录病毒(ERVs)被称为HERVs。内生反转录病毒的整合前病毒形式具有同外生反转录病毒相同的基本结构。一些HERVs向胚系中的整合被认为在3.5到4.5千万年以前便已经发生。因此，它们存在于所有的人类细胞中并且按照普通孟德尔定律进行遗传。这些反转录病毒序列占哺乳动物基因组的1％并因此也占人类基因组的1％。

许多HERVs家族存在于人类基因组中。对于不同的家族，HERVs的每单倍体基因组拷贝数从单拷贝到成千个拷贝不等。最高的核苷酸序列保守性在pol基因中被发现。这一特征被用于推断HERV家族间的亲缘关系。尽管许多HERVs及它们的ORFs是缺陷型的，在多个组织类型的多数HERV家族中已经检测到mRNA转录本(综述见Wilkinson et al.1994，leib-Msch and Seifarth 1996)。另外，在普通的人类胎盘、卵母细胞、teratacarcinomas、乳腺肿瘤组织以及在一些自体免疫患者的唾液腺中已经发现了具有聚合酶和蛋白酶的病毒粒子(综述见Wilkinson et al.1994，Urnovitz and Murphy 1996，Tnjes et al.，1997)。诸如缺氧和紫外照射这样的逆境(stress)条件可能也会诱导HERVs的表达，该表达同在感染性反转录病毒的观察一致(综述见Duvic1995)。

一些HERVs已被定位于基因组内的染色体断点(Di Cristofano etal.1995，Meese et al.1996)。位于不同的染色体位点的HERV序列间的重组可能导致基因组重排列，该重排列包括转位、反转、重复和删除。这样的重组事件引起了基因组的不稳定，该不稳定性是进化的重要特征。另外，许多肿瘤的特征也在于特定的基因组重排，该重排被认为在肿瘤发生中起着关键作用。感染性反转录病毒的存在和肿瘤在宿主中的发展之间的关系提示HERVs与癌症有联系。在缺乏感染性病毒的情况下在原发性肿瘤样品也经常可以观察到毒粒颗粒和反转录病毒相关抗原(Weiss 1984，Faff e al.1992)。另外，在患有癌症的患者体内经显示具有针对反转录病毒蛋白的抗体(Weiss 1984)。进一步，HERV序列被发现在特定的肿瘤衍生细胞系中高效表达(综述见Lwer et al.1996)。

内生前病毒还可以同外生变体进行重组(Martinelli et al.1990)。新的重组体获得一种新的表型。这可能促成新感染性反转录病毒的进化。由于其它部分的突变可能是有害的并与颗粒的形成不相容，主要受影响的为env基因。一些反转录株系被发现在一个物种中是共生的并且在另一个物种中是病原体。这些发现显示出异源移植的一个严重问题。被移植组织提供的共生ERVs在新的宿主中可能是病原性的。它们可能同反转录病毒融合所需的细胞表面受体相互作用，该受体存在于新宿主的细胞表面。另外还可能同该组织受体的基因组中的内生反转录病毒发生重组并且创造出新的感染性反转录病毒，该病毒可能在种群中传播。内生和外生的反转录病毒均可促成遗传材料在种间的横向和垂直传播并且为新病原物质的进化提供机制。