[发明专利]突变型Tn5转座酶及其使用方法无效
| 申请号： | 00811220.7 | 申请日： | 2000-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN1367840A | 公开（公告）日： | 2002-09-04 |
| 发明（设计）人： | W·S·列兹尼科夫;T·A·瑙曼 | 申请（专利权）人： | 威斯康星校友研究基金会 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/10;C12N9/22 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 美国威*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变型 tn5 转座酶 及其 使用方法 | ||
1.一种相对于野生型Tn5转座酶蛋白质修饰的突变型Tn5转座酶蛋白质，其特征在于，所述的突变型转座酶与野生型蛋白质的差异在于选自以下的位点：氨基酸58和氨基酸372位，其中与Tn5外末端相比，该突变型Tn5转座酶蛋白质更偏爱Tn5的内末端。
2.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸58位含有缬氨酸。
3.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸372位含有突变。
4.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸372位含有谷氨酰胺。
5.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的突变型转座酶与野生型蛋白质的差异在于氨基酸58位和372位。
6.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸58位含有缬氨酸且在氨基酸372位含有谷氨酰胺。
7.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的突变型转座酶与野生型Tn5转座酶的差异在于选自以下位点的差异：氨基酸8位和氨基酸344位。
8.如权利要求7所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸8位为半胱氨酸。
9.如权利要求7所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸344位为赖氨酸。
10.如权利要求7所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的突变型Tn5转座酶与野生型Tn5转座酶的差异在于氨基酸8位和氨基酸344位。
11.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸8位含有半胱氨酸和在氨基酸344位含有赖氨酸。
12.如权利要求1所述的突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述的转座酶在氨基酸8位含有半胱氨酸、在氨基酸58位含有缬氨酸、在氨基酸344位含有赖氨酸和在氨基酸372位含有谷氨酰胺。
13.一种编码权利要求1所述的转座酶的多核苷酸。
14.一种编码权利要求12所述转座酶的多核苷酸。
15.一种用于体外转座可转座DNA序列的系统，其特征在于，所述的系统包括：
如权利要求1所述的相对于野生型Tn5转座酶修饰的突变型Tn5转座酶；
供体DNA分子，其包含可转座DNA序列、该序列在5’和3’端侧翼连接有野生型IE序列；和
可转座元件可转座入内的靶DNA分子。
16.如权利要求15所述的系统，其特征在于，所述的IE序列是甲基化的。
17.一种体外转座的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
在低于生理温度的温度下在合适的反应缓冲液中，将靶DNA分子和 1所述的突变型Tn5转座酶与供体DNA分子混合，该供体DNA分子含有感兴趣的可转座DNA序列、而该感兴趣的DNA序列在其5’和3’端侧翼连接有野生型Tn5IE序列，进行反应直到修饰的转座酶结合于此IE序列；和
将温度升高至生理温度一段时间，足以让此酶催化体外转座。
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